保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定.doc

保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定 Determination of theanine in health food by high-performance liquid chromatography 适用范围 本方法规定了红茶、绿茶及以茶氨酸为主要原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于红茶、绿茶及以茶氨酸为主要原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 本方法的最低检出量 1ng。 本方法的最佳线性范围：0.1mg/mL～4.2mg/mL。 2．方法原理 . 将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于红茶、绿茶及以茶为原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 3. 试剂 实验用水为去离子水。 3.1 三氟乙酸：分析纯。 3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗。 3.3茶氨酸标准品：含量大于98％（HPLC）。 3.4茶氨酸标准溶液的配制： 准确称取3.5 mg茶氨酸对照品，溶于水中，用10 mL容量瓶定容，摇匀, 此标准溶液浓度为0.35 mg/mL。 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 水浴锅。 5. 分析步骤 5.1固体试样的处理：准确称取1.0克粉碎试样，加入30 mL H2O，在80℃的水浴锅上加热40 min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至50 ml，试样溶液过0.45 μm水膜，滤液进行色谱分析。 5.2液体试样的处理： 取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣以10ml 水溶解，溶液过0.45 μm水膜，滤液进行色谱分析。 5.3 液相色谱参考条件 5.3.1 色谱柱：反相C18柱，5μm, 100?, 4.6 × 250 mm 5.3.2 紫外检测器：检测波长 203nm 5.3.3 等度淋洗条件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液；流速：1 mL/min 5.3.4 柱温：35°C 5.4 色谱分析 5.4.1 标准曲线的制备 分别取标准溶液2，4，6，10，12 μL进行HPLC分析，用峰面积对进样体积绘制茶氨酸的标准回归曲线。 5.4.2 试样测定 取10μL试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过茶氨酸的标准曲线定量计算试样中茶氨酸的含量。 6. 分析结果的表述 6.1 计算 C × 5 0 试样中茶氨酸的含量（g/g）＝ m × 1000 式中：C  试样溶液中茶氨酸的含量，mg/mL； m 试样质量，g； 6.2 结果表示：分析结果保留三位有效数字。 色谱图