硫化物-醌氧化还原酶（SQR）基因真核表达载体的构建及表达.docVIP

硫化物-醌氧化还原酶（SQR）基因真核表达载体的构建及表达 江苏农业(JiangsuofAgr.Sci.),2011,27(5):1043—1046l043 于峰祥,于建宁,王公金,等.硫化物一醌氧化还原酶(SQR)基因真核表达载体的构建及表达[J].江苏农业,2011,27(5) 1043—1046. 硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因真核表达载体的 构建及表达 于峰祥,于建宁,王公金一,潘伟芹,徐小波,徐志伟,花卫华,刘泉 (1.南京师范大学医学分子生物学重点实验室,江苏南京210097;2.江苏省农业科学院畜牧研究所,江苏南京210014;3 江苏丘陵地区镇江农业科学研究所,江苏句容212400) 摘要:探讨SQR基因真核表达载体pcDNA3.1(一)一SQR—Myc的构建及其在真核细胞中的表达.根据已知荚 膜红杆菌SQR基因序列设计5端和3端引物,采用PCR方法获得SQR基因,通过pMD一18T载体构建得到中间质 粒pMD一18T—SQR—Myc;采用限制性内切酶XhoI和nI双酶切该中间质粒,将SQR基因插入真核表达载体pcD. NA3.1(一)相应酶切位点,获得重组质粒pcDNA3.1(一)一SQR—Myc;采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞并进行West. ernblot蛋白鉴定.结果显示:该研究已成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(一)一SQR—gyc,质粒测序及酶切结果完 全正确,并且SQR能够在HEK293细胞系中正常表达. 关键词:硫化物醌氧化还原酶;重组质粒;真核表达 中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号2011)05—1043-04 Constructionandexpressionofeukaryoticvectorofsulfide?-quinonereduc-- tase(SQR)gene YUFeng.xiang,YUJian—ning,WANGGong-jin,,PANWei.qin,XUXiao.bo,XUZhi.wei., HUAWei.hua,LIUQuan (1.JiangsuKeyLabofMo~calarandMedicineBiotechnology,NanjingNormalUniversity,Nanjing210097,China;2.1mtit~eofAnimalScience,JiangsuAcade- myofAgriculturalSciences,Nanji~210014,China;3.ZhenjianguofAgriculturalSciencesinthe觑RegionofJiangsu,Jurong212400,China) Abstract:ToconstructtheeukaryotievectorpcDNA3.1(一)一SQR—Mycandinvestigateitsexpressionineukaryo— cyte,the5primersand3primersweredesignedandsynthesizedfollowingthegenesequenceofSQRfromRhodobacter capsulatus.Thesulfide—quinonereductase(SQR)genewasobtainedbyPCRandtheintermediatevectorpMD一18T—SQR— Mycwasconstructed.ThevectorwasthendigestedbyrestrictionenzymesXhoIandI,andtheSQRgenewasinsert— edintothethecorrespondingrestrictionenzymecuttingsitetoconstructrecombinantplasmidpcDNA3.1(一)一SQR—Myc.The plasmidpcDNA3.1(一)一SQR—MycwastransientlytransfectedintotheHEK293cellswithlipidosomeandidentifiedbyWest— erRblotting.TheresultsshowedthattheeukaryoticvectorpcDNA3.1(一)一SQR—Mycwasconstructedsuccessfully,which wasconfirmedbyrestrictionenzymedigestionandsequencing.WesternblottingrevealedthatSQRcouldbeexpressedin HEK293cel1s 收稿日期:2010-12—29 基金项目:农业部转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08