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同济医科大学2001年分子生物学（博士） 一、英汉互译下列名词，并加以解释(30分) 1、transposable element 转座子：基因组中可移动的DNA分子，在真核生物的基因和基因组进化中起着重要的作用。 2、restriction enzyme 能够特异性识别dsDNA序列，并且能够在识别位点及其周围切断DNA的核酸内切酶 3、derepression 去阻扼：阻遏蛋白从启动子，操纵子区脱离，解除抑制。染色质去阻扼后出现的开放构象，能促进基因转录。例如，乳糖操纵子中，乳糖与阻遏蛋白结合，改变阻遏蛋白的构象，使之不再与操纵基因结合，RNA-pol II就与启动子结合，开始转录翻译出三种酶，乳糖就是阻遏蛋白与操纵子分离的诱导物。 4、gene therapy 基因治疗：是以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗，用一定方法(病毒载体，非病毒载体)将正常人野生型基因或有治疗作用的基因导入患者靶细胞内，从而置换或者矫正致病基因的一种治疗方法。 5、calmo　dulin 钙调蛋白：钙调蛋白是真核生物细胞胞质溶胶蛋白，由148个氨基酸组成单条多肽，16.7kDa。一种能与钙离子可逆结合的蛋白质。钙离子被称为细胞内的第二信使，其浓度变化可调节细胞的功能，这种调节作用主要是通过钙调蛋白而实现的。 6、操纵子 ：指包含结构基因、操纵基因以及启动基因的一些相 操纵子邻基因组成的DNA片段，其中结构基因的表达受到操纵基因的调控。主要见于原核生物，但在真核生物中也存在。 7、反式作用因子： 一些细胞核内蛋白质可以与顺式作用原件和RNA-pol相互作用，来调控基因转录。Cis-acting element: 真核基因非编码区中能够调控基因转录的DNA序列，包括启动子，增强子，沉默子。 8、基因组 一个细胞，或生物体内的全部基因，全部遗传信息。 9、原癌基因 细胞癌基因，正常情况下静止或极少表达，其表达产物对于细胞生长、分化、增殖有重要作用。一旦激活可以导致细胞恶变，诱发肿瘤的基因。激活方式有：点突变、获得启动子、基因扩增、染色体易位或重排。 10、多克隆位点：载体中有多个限制性内切酶的识别位点，能够插入多个外源基因并且能否复制的位点。 二、试述反式作用因子的结构特征及作用方式(20分) Trans-acting factor是一类细胞核内的蛋白质因子，能够与顺式作用元件和RNA-pol相互作用，调节基因转录活性。一般含有DNA结合结构域和转录活化结构域。 DNA结合结构域：（1） Helix-turn-helix 含有3个helix，其中helix3与DNA识别结合，helix1和helix2与其它蛋白质结合。（2）Zenic finger锌指结构：由相对保守的一段氨基酸序列和锌离子结合，形成相对独立的功能域，像一根手指插入DNA的大沟。两种类型的DNA结合蛋白有这样的模序，一是锌指蛋白，另一个是甾体受体。（3）Leucine Zipper：亮氨酸拉链，两个蛋白质之间相互作用，共同建立一个转录复合体。是一种富含亮氨酸的蛋白质形成的二聚体motif。这种motif可以识别特殊的DNA序列。两个亮氨酸拉链区的反式作用因子依靠疏水力量相互结合，N-端有碱性氨基酸构成的a-helix能够与DNA结合。Eg: AP1与SV40增强子的结合（4）helix-loop-helix: 兼性a-helix具有疏水面和亲水面，两个具有这种的motif反式因子可以形成dimer。仅靠helix的N-端有一段富含碱性氨基酸的序列可以与DNA结合。HLH以同二聚体或者异二聚体作用于顺式作用元件。（5）同源异形结构域homeodomain, 同源异性盒是一种编码60aa的序列，长180bp，几乎存在于所有真核生物中。 转录激活域：与其他转录因子相互作用的结构成分。常见的转录激活结构域有富含谷氨酰胺结构域，富含脯氨酸结构域及酸性α螺旋结构域。 三、试述2型限制酶的功能与特性(20分) Ⅱ 型酶相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或附近切割 DNA ，产生带 3- 羟基和 5- 磷酸基团的 DNA 产物，需 Mg2+ 的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM 。识别序列主要为 4-6bp ，或更长且呈二重对称的特殊序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开的。 ① 有特异识别和切割的序列部位② DNA分子上两个单链断裂的部位通常不是直接相对的③ 断裂所形成的DNA片段常具有碱基互补的单链尾巴（粘性末端）④ 内切酶的切割和修饰功能由两个不同的酶催化所完成，即内切酶活性和甲基化作用活性是分开的 四、试述影响原核基因转录的因素(20分) 原核基因表达调控与真核存在很多共同之处，但因原核生物没有细胞核和亚细胞结构，