第二章蛋白质与非蛋白含氮化合物检验.pptVIP

本章小结 血浆蛋白质有多种功能，PA即TTR能转运甲状腺激素，并结合携带视黄醇的RBP；ALB是最重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白；AAT是最重要的蛋白酶抑制物；AAG是主要的APP；Hp结合Hb并防止Hb从肾脏丢失；α2MG也是主要的蛋白酶抑制剂；血浆铜95％存在于Cp中；TRF携带铁在血液中运输；CRP能结合异物并激活补体。 本章小结 氨基酸代谢紊乱有遗传性和继发性，表现为氨基酸血症和氨基酸尿症，遗传性为代谢酶缺陷，种类很多。 高尿酸血症可分为原发性和继发性两类，主要病因为嘌呤代谢紊乱、尿酸排泄障碍、代谢综合征相关、高嘌呤饮食、各种肾脏疾病和细胞破坏增多。 本章小结 双缩脲法测定血清TP，邻苯三酚红钼法常测定尿液TP。 血清ALB可用BCG法或BCP法测定，其下降在临床多见。 异常血清蛋白质电泳图谱类型较多， 其中肾病型、肝硬化型和M蛋白型较典型。 IFE能确定蛋白质的单克隆属性，诊断浆细胞病等。 体液中个别蛋白质测定多采用免疫比浊法， 其中15种蛋白质已有国际公认的标准参考物质。 体液氨基酸有定性过筛试验，定量测定可采用HPLC法。 体液尿酸常采用尿酸酶-过氧化物酶法，还原性物质对其结果有负干扰。 本章小结 血浆蛋白质在临床上应用较多，肝脏疾病时ALB、PA、胆碱酯酶等下降，PT延长和Ig升高；年青肺气肿者AAT可能缺陷，wilson病时可能Cp减少；缺铁性贫血者TRF升高，溶血性贫血时Hp减少。 APR时血浆蛋白质有正向APPs和负向APPs；某些器官或组织病变时某种血浆蛋白质含量增高。 遗传性氨基酸代谢紊乱最常用体液氨基酸检测。 血清尿酸＞420μmol/L(绝经前女性＞350μmol/L)为高尿酸血症，并可引起痛风，尿液尿酸有助于分析高尿酸血症是生成过多型还是排泄减少型或是混合型。 谢　谢！ * * 五、体液个别蛋白质 【方法评价】免疫比浊法 检测限为10～20mg/L 精密度较好，批内变异系数通常小于5％ 需加促聚剂聚乙二醇加速大的免疫复合物形成 抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物 受血脂影响，尤其是低稀释度时，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，使测定值假性升高。 五、体液个别蛋白质 【方法评价】 免疫化学法已应用于许多体液蛋白质测定 ALB、PA、AAT、AAG、HAP、AMG、CER、TRF、CRP、IgG、IgM、IgA、C3、C4和α1抗糜蛋白酶共15种蛋白质均已有国际公认的标准参考物质CRM470（Certified Reference Material）。 免疫球蛋白轻链κ和λ、β2-mG、α1- mG、RBP、IgD、IgE等，也可采用免疫比浊法测定 六、体液氨基酸（一）过筛试验检测氨基酸 1．氨基酸薄层层析 能将体液中氨基酸分离，并常用茚三酮显色 大多数氨基酸与茚三酮反应呈紫色 六、体液氨基酸（一）过筛试验检测氨基酸 试验和颜色 被检测的代谢物 被检测疾病 三氯化铁 暗蓝绿（持久） 苯丙酮酸 苯丙酮酸尿症 绿（短暂） 对–羟苯丙酮酸 酪氨酸血症 蓝（短暂） 尿黑酸 尿黑酸尿症 灰绿 咪唑、丙酮酸 组氨酸血症 灰蓝 支链酮酸 支链酮酸尿症 蓝绿 5-羟吲哚乙酸 类癌 紫色 水杨酸盐 （干扰物） 紫褐 吩噻嗪 （干扰物） 氰化物/硝基氰酸盐 樱桃红 胱氨酸 胱氨酸尿症 同型胱氨酸 同型胱氨酸尿症 胱氨酸–同型胱氨酸二硫化物 同型胱氨酸尿症 青霉胺-胱氨酸二硫化物 （治疗） 2,4-二硝基苯肼 黄白色 支链酮酸，苯丙酮酸 支链酮酸尿症，苯丙酮酸尿症 亚硝基萘酚：橙红色 酪氨酸及其代谢物 酪氨酸代谢紊乱，酪氨酸血症 2．尿氨基酸颜色试验 六、体液氨基酸（一）过筛试验检测氨基酸 3.Guthrie微生物试验 琼脂培养基中含有能特异针对某种待检氨基酸的竞争性抑制剂，结构与待检氨基酸相似。 将枯草芽孢杆菌芽孢加入，样品点到纸片上并放到琼脂表面，琼脂板孵育后观察细菌生长。 若有高浓度待检氨基酸，氨基酸抑制剂的作用减弱或被克服，能观察到菌株生长。 将系统设计成待检氨基酸超过其参考上限时显示细菌生长，来检测疾病。 六、体液氨基酸（二）氨基酸定量 1．色谱法 GC法：样品用量少、灵敏和快速，但在仪器所具有的温度下可挥发性低。临床实验室应用少 HPLC法：分辨率和灵敏度均高，分析时间相对短，较广泛地应用于体液氨基酸的测定。 六、体液氨基酸（二）氨基酸定量 2.酶法 L-苯丙氨酸： L-苯丙氨酸脱氢酶法 L-苯丙氨酸氧化酶法，生成醌亚胺 苯丙酮酸：L-苯丙氨酸脱氢酶法。 谷氨酰胺：谷氨酰胺酶和谷氨酸脱氢酶催化。 支链氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸）： 亮氨酸脱氢酶法，氧化脱氨生成酮酸，NAD还原成NADH 七、体液