临床酶学检验基本原理和方法.pptVIP

第*页 （三）实验参数 ?一般参数：1.项目名称；2.方法类别；3.试剂类别；4.试剂位置；5.标本位置；6.冲洗次数 ?技术参数：1.方法类型；2.波长选择；3.样品用量4.试剂用量5.稀释水量；6.试剂吸光度上下限；7.空白速率 ?时间参数：1.孵育时间；2.延迟时间；3.监测时间；4.底物耗尽时间 ?质控参数：1.参考值范围；2.线性范围；3.计算因子F值 三、其他因素的影响 参考系统 IFCC推荐方法 参考程序 参考实验室 室内质控 仪器之间比对 室间质评 系统之间比对 测定系统 IFCC推荐方法 操作程序 试剂合制造商 测定系统 IFCC推荐方法 操作程序 临床检验实验室 酶参考物 移植的 酶校正物 参考网络 实验室 定值 试剂盒 酶校正物 溯源链 厂家网络 实验室 定值 第*页 按照理化性质不同进行分离鉴定 一 二 第四节 同工酶检测技术 按照其他性质不同进行鉴定 第*页 同一种属中由不同基因或等位基因编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化作用，但其分子构成、空间构像、理化性质、生物学性质以及器官分布或细胞内定位不同的一组酶称为同工酶（isoezyme）。 凡酶蛋白结构不同的同工酶称为原级同工酶，而将经加工或修饰后的同工酶称为次级同工酶或酶多种形式。 某些同工酶从组织进入体液后在蛋白酶作用下降解成不同的亚型（isoform）。 同工酶及亚型的概念 第*页 电泳法 由于各型同工酶的一级结构或空间构象不同，形状也不同，因而带电性质不同，在电场中的电泳迁移率不同，使各型同工酶分离,然后用酶催化性质选择合适的显色系统使区带呈色。 评价： 　　　优点是可获得同工酶谱的全貌 缺点是其显色系统不可能是所有同工酶的最适条件，而且定量也比较困难 　　　酶与体内的白蛋白、免疫球蛋白等复合物形成“矫作物” 按照理化性质不同进行分离鉴定 一 第*页 第*页 蛋白质 同工酶 支持物准备、平衡、 加样、电泳 固定后染色 蛋白质染料 不固定 酶促反应产物显色 扫描定量 扫描定量 电泳法测定同工酶与蛋白质区别 支持物准备、平衡、 加样、电泳 第*页 按照其他性质不同进行分离鉴定 二 抑制法原理： 　　　免疫抑制法原理是利用某一亚基的特异性抗体与同工酶中对应的亚基特异结合而抑制其活性；化学抑制法是利用一定浓度某些化学试剂选择性抑制某类同工酶；分别测定抑制前后的酶活性，间接计算出各类同工酶的活性。 评价： 　　　免疫抑制法优点是抑制特异性高；缺点是需要制备抗体，测定成本高。化学抑制法往往存在待测同工酶同时被抑制或其他同工酶抑制不彻底的缺点。 正常和病理状况时琼脂糖凝胶电泳分析血清CK同工酶可能出现的酶带 第*页 小 结 1. 根据酶是蛋白质和生物催化剂这两大特性，酶浓度的定量可以分别用酶蛋白质量或酶催化活性来表示。酶催化活性测定方法简便、快速、经济，是酶浓度的定量的主要手段。 2. 酶催化活性是用酶促反应的反应速度来表示，检测速度的方法分为定时法和连续监测法，目前连续监测法已经逐步取代了定时法。 3. 连续监测法按原理来分可分为色素原底物、脱氢酶指示系统、氧化酶指示系统等。 第*页 小 结 4. 酶催化活性是一种酶浓度相对定量的方法，与测定方法、测定条件、原料来源、仪器状态、分析参数、校正品等多种因素有关，各实验室应按最适条件的原则选择方法和使用，力求检测结果具有可比性。 5. 至今IFCC已建立ALT、AST、CK、LD、GGT、ALP测定的参考方法和参考物质，也有AMY、CHE、LPS测定的推荐方法。 6. 酶活性参考物质不是标准品，必须与测定系统其他要素一起使用才有价值。 秋色 * * * * 第*页 3.4 K的校准（酶校准物） 使用公认的酶校准物对K值进行校准，它是国际上目前酶测定标准化新途径。 使用酶校准物的优点， 除具有实测ε值换算出的校准K值所具有的一切优点外， 还可促进方法间的一致性和增加常规酶方法的可靠性，可使不同实验室之间的测定结果相对统一。 第*页 3.4 K的校准（频率） 最好（低）每半年进行一次酶活性的校准。 仪器在使用过程中，滤光片、加样系统的精度都可能发生变化，光学系统的灯泡、光电转换元件的老化、灵敏度变化等，都会导致测定结果的偏差。 但日常工作中，遇到下列情况时，必须进行校准： 试剂盒改变厂家，或者更换了批号； 仪器性能改变，如进行一次大的预防性维护或者更换了重要部件； 质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时。 定时法 无机P 酚 氨 萘胺 NAD(P)H H2O2 丙酮酸 淀粉 ALT、AST、LD ALP、ACP、5’NT ALP、ACP ADA、脲酶 CK、GGT LD、