核酸生物合成与基因工程.ppt

第三节 核酸合成的抑制剂 某些核酸代谢的拮抗物和抗生素可抑制核苷酸或核酸的合成，因而可以用于抗病毒或抗肿瘤药物，也可以用于核酸的研究 （一） 嘌呤和嘧啶类似物 （二） DNA模板功能的抑制剂 （三） RNA聚合酶的抑制物 核酸生物合成的抑制剂 （一） 嘌呤和嘧啶类似物 抑制核苷酸的合成，还能掺入核酸分子中去，形成异常DNA、RNA，影响核酸功能。 主要有：6-巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、2.6—二氨基嘌呤、8-氮鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶 、6-氮尿嘧啶 碱基类似物进入体内后需转变成相应的核苷酸，才表现出抑制作用。 （二） DNA模板功能的抑制剂 此类化合物能与DNA结合，使DNA失去模板功能，从而抑制其复制与转录。 1.烷化剂 氮芥（二（氯乙基）胺的衍生物）、磺酸酯、氮丙啶、乙撑亚胺类。它们带有活性烷基，使DNA烷基化。 烷化位点：鸟嘌呤N7 ，腺嘌呤N1、N3、N7，胞嘧啶N1 烷基化后，碱基易被水解下来，留下的空隙可干扰DNA复制或引起错误碱基掺入。带有双功能基团的烷化剂，可同时与DNA两条链结合，使双链DNA交联，从而失去模板功能。 环磷酰胺：肿瘤细胞中磷酰胺酶活化，生成活性氮芥。 苯丁酸氮芥：癌细胞酵解作用强，乳酸多，pH低，苯丁酸氮芥易进入。 2.放线菌素D（对真核、原核细胞都起作用） 有抗菌和抗癌作用。 它可与DNA形成非共价复合物，使其多肽部分在DNA的“浅沟”上如同阻遏蛋白一样，抑制DNA的转录和复制。 此类机理的放线菌素还有色霉素A3、橄榄霉素、光神霉素。 3.嵌入染料 扁平芳香族染料，可插入双链DNA相邻碱基对之间。 溴化乙锭插入后，使DNA在复制时缺失或增添一个核苷酸，从而导致移码突变，并能抑制RNA链的起始及质粒的复制。此外还有原黄素、吖啶黄、吖啶橙等。 （三） RNA聚合酶的抑制物 1、利福霉素 包括其衍生物利福平，特异地抑制细菌RNA聚合酶的活性。 强烈抑制革兰氏阳性菌和结核杆菌，它主要抑制RNA合成的起始。 2、利链菌素 与细菌RNA聚合酶β亚基结合，抑制转录过程中链的延长。 3、α-鹅膏蕈碱 主要抑制真核RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ，对细菌的RNA聚合酶作用极小。 第四节 基因工程 一、基因工程的概念 二、基因工程的操作技术 三、基因工程的应用及前景 基因工程是指在微观领域（分子水平）中，根据分子生物学和遗传学原理，设计并实施一项把一个生物体中有用的目的DNA(遗传信息)转入另一个生物体中，使后者获得新的需要的遗传性状或表达所需要的产物，最终实现该技术的商业价值。 一、基因工程的概念 基因工程与建筑工程 重组DNA技术的重大突破带动了现代生物技术的兴起，并很快产生了许多生命科学的高技术产业。 重组DNA技术，又称为基因或分子克隆技术，是基因工程的核心技术。该技术包括了一系列的分子生物学操作步骤。 所谓基因工程(genetic engineering)就是有意识地把一个生物体中有用的目的基因转入另一个生物体中，使后者获得新的遗传性状或表达所需要的产物。 二、基因工程的操作技术 重组DNA技术是基因工程的核心技术 　 　 DNA克隆 克隆（clone）： 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 克隆化（cloning）： 获取同一拷贝的过程，即无性繁殖。 分子克隆（DNA克隆） 细胞克隆 个体克隆（动物或植物） 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 基础理论 技术发明 重组DNA操作一般步骤： （1）获得目的基因； （2）与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子； （3）用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传； （4）对转化子筛选和鉴定； （5）对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。 基因操作的基本步骤 获得需要的目的基因常用的方法： （1）直接从生物体中提取总DNA，构建基因文库(gene library)，从中调用目的基因； （2）以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段； （3）利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩增所需要的目的基因片段，等等。 1.获得需要的目的基因（外源基因） 细胞内总DNA的提取分离与基因文库的构建 细胞内总DNA的提取分离程序 紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。 基因文库的构建 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，便构成了该生物的基因文库。 反转录人工合成互补DNA 构建基因文库获取