PEG胁迫对番茄幼苗叶片SOD同工酶的影响.docVIP

PAGE PAGE 1 PEG胁迫对番茄幼苗叶片SOD同工酶的影响 　　摘要：以4个番茄品种为材料，采用改进的氮蓝四唑光还原法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法，研究了经聚乙二醇模拟干旱胁迫处理后，番茄幼苗叶片超氧化物歧化酶（SOD）同工酶活性及酶谱的变化。结果表明，4个番茄品种的SOD同工酶活性均较对照明显增加，各品种的胁迫系数高低顺序依次为中蔬4号、中杂105、Moneymaker、中杂9号；模拟干旱胁迫处理没有使各品种SOD同工酶酶谱条带数目出现增加，仍为3条，SOD同工酶条带对干旱响应敏感程度的大小排序依次为SOD-Ⅲ、SOD-Ⅱ、SOD-Ⅰ，其中SOD-Ⅲ条带的酶谱亮度、带宽在处理与对照之间均明显增加，增加程度大小的品种排序依次为中蔬4号、中杂105、Moneymaker、中杂9号，与胁迫系数一致，说明SOD与干旱胁迫密切相关的同工酶为SOD-Ⅲ，其可能是番茄耐旱品种SOD同工酶活性较高的根源；所以SOD-Ⅲ条带可作为番茄抗旱生理育种的筛选指标。 　　关键词：番茄；聚乙二醇；胁迫；超氧化物歧化酶同工酶 　　中图分类号：S641.2；Q945.78；Q554文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）08-1833-03 　　干旱是影响作物生长和产量的重要环境因素之一，其会使植株在形态特征、理化特性方面发生一系列的变化，导致作物体内聚集大量的活性氧等有害物[1]。超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）同工酶作为作物响应干旱等逆境胁迫的防御性保护酶之一，可以有效地清除超氧阴离子自由基、防止脂质氧化、减少对膜系统的损伤[2]。SOD广泛存在于植物体内，已有报道表明在干旱胁迫下会引起植物SOD同工酶活性[3-5]及酶谱的变化[6]，但未见干旱胁迫对番茄（SolanumlycopersicumL.）SOD同工酶酶谱影响的报道。聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）是一种高分子渗透剂，能导致作物组织和细胞处于类似干旱的水分胁迫状态之中，但本身不穿越细胞壁进入细胞质，不会引起质壁分离[7]，因此是作物模拟干旱胁迫试验的良好替代品。本试验采用PEG-6000模拟干旱胁迫处理，对番茄幼苗叶片的SOD同工酶活性及酶谱的变化进行了比较，以期揭示其变化规律，旨在为番茄抗旱生理育种提供参考依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1植物材料供试番茄品种有中杂105（S.lycopersicumcv.Zhongza105）、中杂9号（S.lycopersicumcv.ZhongzaNo.9）、中蔬4号（S.lycopersicumcv.ZhongshuNo.4），由中国农业科学院蔬菜花卉研究所提供；另一个番茄品种Moneymaker（S.lycopersicumcv.Moneymaker）由荷兰瓦格宁根大学植物育种系提供。 　　1.1.2试剂与药品主要试剂有乙醇、HgCl2、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、甲硫氨酸、氮蓝四唑（NBT）、四甲基乙二胺（TEMED）、EDTA-Na2、核黄素等，均为分析纯；Hoagland培养液和磷酸盐缓冲液自配，模拟干旱胁迫用品20%PEG-6000也为分析纯。 　　1.1.3仪器主要有DYY-Ⅲ型电泳仪及配套电泳槽、电源（北京六一仪器厂）、DK-S电热恒温水浴锅（上海棱谱仪器仪表有限公司）、PL2002电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]、PHS-3GpH酸度计（上海雷磁仪器厂）、FYL-YS实验用冰箱（北京福意电器有限公司）、KR-GZ人工气候室（河南科瑞科技有限公司）等。 　　1.2方法 　　1.2.1材料处理与取样每个番茄品种挑选100粒饱满种子，经1g/LHgCl2溶液消毒8min，去离子水反复冲洗；吸胀7h后28℃催芽72h，将萌发一致的种子置于含1/2Hoagland培养液的培养盆中水培，定苗6株/盆，然后移入昼夜温度为（26±2）℃/（19±2）℃的人工气候室内，幼苗经20d（可长出约2或3片真叶）培养，以加入20%PEG-6000的1/2Hoagland培养液的幼苗水培为处理组（模拟干旱胁迫处理），同时设不加20%PEG-6000的幼苗水培为对照组，均3次重复。在培养期间，每12h相应更换1次培养液，以减少试验的浓度误差。在试验开始时（0h）和处理后的24、48、72h分别对2组番茄幼苗的叶片取样分析。 　　1.2.2SOD同工酶活性测定①SOD粗提。剪取不同处理各番茄品种幼苗叶片（去叶脉）0.5g，加入1mL预冷的50mmol/L磷酸盐缓冲液（pH7.8，内含1%PVP），冰浴研磨至匀浆，加磷酸盐缓冲液补充至终体积5mL，匀浆液于4℃10000r/min离心15min，上清液即为SOD粗提液。②SOD活性测定及胁迫系数计算。采用