目的基因导入受体细胞幻灯片资料.ppt

与RNA上U的C5相连 C链连接臂 biotin 地高辛(DIG) 地高辛(DIG)是一种类固醇类的半抗原，又称为异羟基洋地黄毒苷配基，自然界中仅在毛地黄植物中发现，其他生物体中不含有抗地高辛的抗体，避免了采用其他半抗原作标记可能带来的背景问题。 该配基通过一个由11个碳原子组成的连接臂与尿嘧啶核苷酸嘧啶环上的第5个碳原子相连，形成地高辛标记的尿嘧啶核苷酸。地高辛与抗地高辛抗体能发生免疫结合，利用抗地高辛抗体上带有的酶标记就可进行探针的检测。 荧光素 荧光素是一类能在激发光作用下发射出荧光的物质，包括异硫氰酸荧光素、羟基香豆素、罗达明等。 荧光素与核苷酸结合后即可作为探针标记物，主要用于原位杂交检测。荧光素标记探针可通过荧光显微镜观察检出，或通过免疫组织化学法来检测。 （3）探针标记方法 探针的标记有体内标记及体外标记两种方法。 体内标记法是以标记化合物作为代谢底物，通过活体生物或活细胞的体内代谢完成核酸分子标记，例如在培养基中加入3H-胸苷，就可以标记到生长在该培养基中的活细胞DNA分子上。 体内标记法受多种因素的限制，且标记活性不高，一般很少使用。 体外标记 包括化学法和酶法两种。 化学标记法是利用标记物的活性基团与核酸分子中的某种基因(如磷酸基团)发生化学反应而直接将标记物连接到探针分子上，具有简单快速、标记均匀的特点，尤其适于制备非放射性标记物的探针。 常用的化学