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12391—1990中华人民共和国国家标准食物中核黄素的测定方法Method for 12391—1990 中华人民共和国国家标准 食物中核黄素的测定方法 Method for determination of riboflavin in foods GB/T 12391—1990 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用微生物法和荧光法测定食物中核黄素含量。 本标准适用于各类食物中核黄的测定。 第一篇 微生物法 2 原理 某一种微生物的生长（繁殖）必需某些维生素。例如干酪乳酸杆菌 （Lactobacillus casei，简称 L.C. ）的生长需要核黄素；培养基中若缺乏这 种维生素该细菌；便不能生长。在一定条件下，该细菌生长情况。以及它的代谢 物乳酸的浓度与培养基中该维生素含量成正比，因此可以用酸度及混浊度的测定 法来测定样品中核黄素的含量。 3 试剂 本实验用水均需蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。 3．1 3．2 3．3 3．4 3．5 3．6 3．7 3．8 3．9 3．10 冰乙酸。 甲苯。 无水乙酸钠。 乙酸铅。 氢氧化铵。 干酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei ATCC 7489）。 盐酸：0.1 mol/L。 氢氧化钠：1 mol/L 和 0.1 mol/L。 0.9%氯化钠溶液（生理盐水）：使用前应进行灭菌处理。 核黄素标准储备液（25 ug/mL）：将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥 器或盛有硫酸的干燥器中。经过 24 h 后。准确称取 50 mg，置于 2 L 容量瓶中， 加入 2.4 mL 冰乙酸和 1.5 L 水。将容量瓶置于温水中摇动，待其溶解，冷至室 温，稀释至 2 L，移至棕色瓶内，加少许甲苯盖于溶液表面，于冰箱中保存。 3．11 核黄素标准中间液（10 ug/mL）,准确吸取 20 mL 核黄素标准储备液，加 水稀释至 50 mL。 3．12 核黄素标准中间液（0.1 ug/mL），准确吸取 1.0 mL 中间液于 100 mL 容 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。每次分析要配制新标准使用液。 3．13 碱处理蛋白胨：分别称取 40 g 蛋白胨和 20 g 氢氧化钠于 250 mL 水中。 混合后，放于 37±0.5℃恒温箱内，24～48 h 后取出，用冰乙酸调节 pH 至 6.8， 加 14 g 无水乙酸钠（或 23.28 含有 3 分子结晶水的乙酸钠），稀释至 800 mL， 加少许甲苯盛于溶液表面，于冰箱中保存。 3．14 0.1%胱氨酸溶液：称取 1 gL—胱氨酸于小烧杯中。加 20 mL 水，缓慢加 入经约 5～10 mL 盐酸，直至其完全溶解，加水稀释至 1 L，加少许甲苯盖于溶 中华人民共和国卫生部 1990—03—19 批准 1990—12—01 实施 12391—1990液表面。3．15酵母补充液：称取 100 g 酵母提取物干粉于 500 mL 水中、称取 150 12391—1990 液表面。 3．15 酵母补充液：称取 100 g 酵母提取物干粉于 500 mL 水中、称取 150 g 乙酸铅于 500 mL 水中。将两溶液混合，以氢氧化铵调节 pH 至酚酞量红色（取少 许溶液检验）。离心或用布氏漏斗过滤，滤液用冰乙酸调节 pH 至 5.5。通入硫化 氢直至不生沉淀。过滤，通空气于滤液中，以排除多余的硫化氢。加少许甲苯盖 于溶液表面，于冰箱中保存。 3．16 甲盐溶液：称取 25 g 磷酸氢二钾和 25 g 磷酸二氢钾，加水溶解，并稀 释至 500 mL。加放少许甲苯以保存之。 3．17 乙盐溶液：称取 10 g 硫酸镁（MgSO4·7H2），0.5 g 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O） 和 0.5 g 硫酸锰（MnSO4·4H2O），加水溶解，并稀释至 500 mL，加少许甲苯以保 存之。 3．18 基本培养储备液：将下列试剂混合于 500 mL 烧杯中，加水至 450 mL， 用 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 6.8，用水稀释至 500 mL。 碱处理蛋白胨 0.1%胱氨酸溶液 酵母补充液 甲盐溶液 乙盐溶液 无水葡萄糖 100 mL 100 mL 20 10 10 10 mL mL mL g 3．19 琼脂培养基：将下列试剂混合于 250 mL 三角瓶中，加水至 100 mL，于 水浴上煮至琼脂完全溶化，用 1 mol/L 盐酸趁热调节 pH 至 6.8。尽快倒入试管 中，每管 3～5 mL，塞上棉塞，于高压锅内在 5.9×104Pa（10 lb/in2）压力下灭 菌 15 min，取出后直立试管，冷至室温，于冰箱中保存。 无水葡萄糖 乙酸钠（NaAc·3H2O） 蛋白胨 酵母提取物干粉 甲盐溶液 乙盐溶液 琼脂 1 g 1.7 0.8