细胞学第五章 动物组织和细胞培养.ppt

2)指数增生期（Logarithmic growth Phase）：●这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。●一般以细胞分裂指数（Mitotic Index：MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。 ●一般细胞的分裂指数介于0.1%～0.5%，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达3%～5%。 A 接触抑制：在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续3～5天后，随细胞数量不断增多、生长空间渐趋减少、最后细胞相互接触汇合成片。细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制（Contact Inhibition）。 B 密度抑制：细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制（Density Inhibition），导致细胞分裂停止。 指数增生期会发生: 3)停滞期（Stagnate Phase）： 　　细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。此时细胞数量不再增加，故也称平台期（Plateau）。 　　停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。 　　此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。 当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代（Passage或Subculture）。 (三)体外培养细胞的种类 1初代培养 初代培养又称原代培养，即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。 　　一旦已进行传代培养（Subculture）的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。 2细胞系 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。 　　如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（Finite Cell Line）；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line）。 　　无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。 3细胞株 ? 　从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。 　　 4肿瘤细胞系或株 这是现有细胞系中最多的一类，我国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞，常已传几十代或百代以上，并具有不死性和异体接种致瘤性。 细胞系或细胞株的命名 HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）CHO：中国地鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary） 宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974年3月建立 细胞系或株的鉴定、管理和使用 ATCC入库细胞要求检测项目如下： 培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等 冻 存 液：培养基和防冻液名称 细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性 培 养 液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量 * (2)细胞活动小, 细胞膜的活动小(3)生长组分下降: 0~10%(4)及时转代 若细胞已中毒，即使进行传代，也会影响下 一代细胞的功能状况 对细胞造成的损伤，至少需再经 过1～2次传代之后，才能修复损失、淘汰掉死细胞，恢复旺盛的生长状态 1989年12月13日，戴维斯夫妇的第一个女儿艾玛诞生 2005年12月7日，女婴尼亚姆经由剖腹产健康地降临到了人世。 据悉，艾玛和尼亚姆是先后通过17年前的同一组冷冻胚胎孕育诞生的，5个月大的“时空扭曲双胞胎”妹妹尼亚姆更是打破了一个医学史纪录，因为此前世界上还没有哪个受精胚胎被冷冻了长达16年时间才孕育出生。 (五)细胞培养的污染和检测 细胞污染的种类可分成：细菌、酵母菌、霉菌和病毒。 显微镜观察法 细菌 1.细菌和真菌的污染和检测 显微镜观察法 霉菌 2.支原体的污染和检测 造成支原体高污染率的原因： 　　1.支原体大小0.1－0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）； 　　2.支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化 1)DNA荧光染色法 　　原理︰利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）检测支原体污染。此染剂会结合到DNA之A-T区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所