生导第3 4章 细胞2012.ppt

Oct-4（也称Oct-3）属于POU转录因子家族的一员[1~3] 。是哺乳动物胚胎发育的一个关键的调控因子。是全能性的标志，它能够促使ICM形成、维持胚胎干细胞未分化前状态并促进其增殖。 SOX2基因是编码转录因子的主控基因（master genes）家族的一个成员。转录因子是些与DNA结合并调节其他基因表达的蛋白质 癌症基因c-MYC，是一种最容易过渡表现于人类的致癌基因，它对某些成体干细胞的自我更新起一定的作用，并可以抑制ES细胞的分化。 Krueppel-like factor 4，KLF4上皮锌指转录因子Klf4 (旧称GKLF), 调节体外细胞的增生与分化 由人类皮肤体细转化为胚胎干细胞的验证 1) iPS细胞具有人类自然胚胎干细胞的形态. 2) iPS细胞具有正常的核型. 3) 具端粒酶活性. 4) 细胞表面膜蛋白标记与自然胚胎干细胞相同. 5) 基因表达譜相一致. 6) Oct4启动子甲基化模式与自然胚胎干细胞相似. 7) 具有发育成三胚层细胞的潜能, 来自iPS细胞的 畸胎瘤可分化为多种组织细胞. * * 干 细 胞 1) 具有分化能力的细胞称为干细胞. 2) 单能干细胞: 具有分化特定种类细胞潜能的干细胞. 3) 多能干细胞: 具有分化多种类型细胞潜能的干细胞. 4) 全能干细胞:具有分化各种类型细胞潜能的干细胞. 不同发育阶段的干细胞 肝脏修复 1997年2月，Wilmut等利用绵羊乳腺细胞成功的克隆出体细胞核移植后代，根本动摇了原有的传统结论，并使哺乳动物克隆技术进入了一个划时代的新阶段。 干细胞治疗程序 07年以来，iPS 最激动人心之技术，长生不老有望！ 俞君英在汤姆森实验室内进行有关干细胞的试验 美国威斯康星大学詹姆斯·汤姆森和日本京都大学山中伸弥将 Oct4, Sox2, Klf4 和c-Myc 等4个基因导入皮肤细胞,使其逆转为多能干细胞. 寻找决定胚胎干细胞命运的基因 1) Yamanaka等选择24个在胚胎干细胞和肿瘤细胞中表达上调的基因作为胚胎干细胞决定候选基因. 2) 将上述基因构建到逆转录病毒表达载体中,它们Fbx15基因的调控顺序控制, 将它们转化老鼠胚胎成纤维细胞(MEF). 3) Fbx15基因为胚胎干细胞专一性表达. 4) 实验结果证实单个外源基因的导入不能获得胚胎成纤维细胞的逆转, 但组合的转化可产生具有胚胎干细胞形态特征的细胞, 这些细胞被称为iPS(induced pluripotent stem)细胞. 见: Cell 126:663-676, 2006 胚胎干细胞命运决定基因筛选策略 胚胎干细胞决定基因的筛选 1) 上述小组在10个基因组合产生MEF细胞逆转的基础上,采取排除法确定4个基因为MEF细胞逆转所必需, 分别为: Oct3/4, Klf4, Sox2和c-Myc. 2) 在这初筛的4个基因中任意缺失一个基因,均不能产生类胚胎干细的特征.因此这4个基因是最低要求的逆转MEF细胞的因子. 3) Oct3/4, Klf4, Sox2和c-Myc四个基因转化的MEF细胞可促使Fbx15和Nanog基因的表达. 4) Fbx15和Nanog基因的表达可作为筛选iPS细胞的标记. iPS细胞的全能性被首次证明 《Nature》09年7月23日发表中国科学家周琪、曾凡一完成的研究成果，首次利用iPS细胞（诱导性多能干细胞），通过四倍体囊胚注射得到存活并具有繁殖能力的小鼠，从而在世界上第一次证明了iPS细胞的全能性。 周琪等利用iPS细胞系注射了1500多个四倍体胚胎，最终3株iPS细胞系获得了共计27个活体小鼠，有些小鼠现已发育成熟并繁殖了后代。 这是世界上第一次获得完全由iPS细胞制备的活体小鼠，有力地证明了iPS细胞具有真正的全能性。 干细胞新时代: 通过p53路径解决iPS技术转化效率低和致癌性的问题 山中伸弥在内的5个研究团队通过p53路径解决iPS技术转化效率低和致癌性的问题。山中伸弥还从信号通路方面破解了这一机制。表明p53路径是调控细胞程序重排的重要关键路径，它关系到转化率的高低。 这些研究成果也解释了iPS致癌性的形成机制。更重要的是，科学家们也发现P53是调控细胞程序重排的关键因子。?Whitehead研究所的干细胞专家Jacob Hanna对这些成果仍旧持谨慎态度，她表示，还有些遗传风险是没有消除的，要临床转化还需要深入的研究。 路漫漫兮其修远-----iPS细胞具有癌症倾向 1) 含有iPS来源的小鼠个体有一定的比例产生癌症. 2) 产生癌症的原因: 1, LTR载体的影响;