蛋白质结晶研究进展_王岸娜.pdfVIP

第 35 卷第 5 期 河南工业大学学报 （自然科学版） Vol.35 ，No.5 2014 年 10 月 Journal of Henan University of Technology （Natural Science Edition） Oct.2014 文章编号：1673-2383(2014)05-0107-09 网络出版网址：/kcms/detail/41.1378.N1723.022.html 网络出版时间：2014-10-29 17:23:36 蛋白质结晶研究进展 ，苏子豪，吴立根* ，孙敬捧 王岸娜 ，张 曼 工业大学 粮油食品学院，河南 郑州 450001 ） （河南 摘要：蛋白质作 为生命 活动 的载体 ，研究其 分子结构及发挥 生物活性的机制具有 重要意义. 结 晶 作 为研究 生物 大分子结构及 功 能的重要手段 ，近年 来发展 迅速 . 介 绍影响蛋白质 结 晶的 因素、目 前 常用的蛋白质 结 晶方法以及提高蛋白质 结 晶条件 筛选率和衍射 质量的新技术和新策略 ，这对 蛋白质 结 晶的研究有一定的推动作 用. 关键词：蛋白质 ；结晶方法；影响因素；筛选 ；分子改造 中图分类号：TS201.2 文献标志码： A 0 引言 1 蛋白质的结晶过程 到目前为止蛋白质结晶问题仍是蛋白质研 蛋白质结晶是溶液中的蛋白质分子经一定规 究的一个瓶颈[1] . 由于生物大分子的物理、化学及 则排列堆积形成有序聚集体的过程，其结构特征是 生物性质复杂，使蛋白质的晶体培养工作变得相 有序的结构框架及溶剂分子共同形成的空间网 当复杂 [2] . 蛋白质晶体内部有40%~60% 的空间被 状结构[5] . 蛋白质结晶可分为形核和晶核生长两个 溶剂分子填充，在晶体内形成孔隙和通道，使晶体 阶段. 形核包括均相成核和非均相成核. 晶核生长 的韧度、硬度降低，可能加剧晶体排列的不规则性. 是处于亚稳区或不稳定区的蛋白质分子与晶核接 蛋白质分子间的作用力导致晶格排列上的不规 触有序结合到晶格结构上的过程[6] . 蛋白质结晶只 则情形的增加[3] ，这也增加了蛋白质结晶的难度. 有在蛋白质溶液过饱和时才会发生. 根据过饱和 尽管高通量结构基因组学简化了目标蛋白质 程度的不同，蛋白质溶解相图分为溶解区、亚稳 的表达纯化结晶及数据的收集过程，但仍只有少 区、不稳定区及沉淀区[7] . 在不稳定区形成少量晶 量蛋白质能形成满足衍射要求的单晶[4] . 研究生物 核，使晶核在亚稳区缓慢生长，这是目前比较理想 大分子结晶的一般原理和条件，获得晶体衍射数 的晶体生长条件[8] . 据，对食品安全、药物研发与设计等领域有重要推 获得过饱和蛋白质溶液的原理一般有 4 种： 动作用. 目前蛋白质结晶学发展还不成熟，蛋白质 改变蛋白质性质、改变水的化学活性、调整蛋白质 结晶在很大程度上是基于经验性的. 作者主要讨 分子间作用、调整蛋白质分子与溶剂的相互作用. 论了影响蛋白质结晶的因素，介绍了常用的蛋白 常用的获得过饱和溶液的方法大部分依据这4 种 质结晶方法，并对提高结晶筛选率的新策略和新 原理（表 1）. 技术作了详细介绍.