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荧光分光光度法测定维生素 B 的含量 2 实 验 报 告 ——应用化学（环境检测与分析） 一、实验目的 1、掌握标准曲线法定量分析维生素 B2 的基本原理。 2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。 二、实验原理 1 什么是荧光？ 荧光是光致发光。当物质的分子接受光子能量被激发后，从激发单重态的最低振动能级返回 基态时发射的光。 2 3 荧光与环境因素的关系 取代基的性质、溶剂的极性、体系的 pH 和温度。 维生素 B2(Vitamin B2) ，别名：核黄素 (Riboflavin ，RF) ，是橘黄色无臭的针状结晶 , 分子式： C H N O ，相对分子量为： 376.37 。因其色黄且含有核糖醇，故称为核黄素。结构式为： 17 20 4 6 1 2 由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素 B 易溶于水而不 溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。 维生素 B2 溶液在 430— 440nm 蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在 535nm 附近。维生素 B2 在 pH＝6— 7 的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素 B2 溶液浓度呈线性关系，因此可以 2 用荧光光谱法测维生素 B 的含量。维生素 B2 在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物 质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素 B2 的荧光强得多，故测维生素 B2 的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。 在稀溶液中，荧光强度 F 与物质的浓度 c 有以下关系： F＝2.303 ФI 0 εbc 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系： F=Kc 这是荧光光语法定量分析的依据。 三、仪器与试剂 1、主要仪器：荧光分光光度计（日立 F— 7000 ）；比色皿： 1cm；容量瓶： 50mL；移液管： 5mL。 2、试剂：核黄素；维生素 B2 药片 四、实验步骤 1. 溶液的配制 标准溶液的配制：精确称取 2 mg 核黄素 (VB2) ，用超纯水于 50ml 棕色容量瓶中定容 2 待测液的配制： 将维生素 B 药片研磨成粉末状， 精确称取 2mg，用超纯水于 50ml 棕色容量瓶中定容； 2. 扫描激发光谱和荧光光谱 3. 标准曲线的绘制 在室温条件下，分别吸取 1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 标准溶液于 50ml 棕色容量瓶中定容。用超纯 水作空白试样，测定溶液荧光强度值。用所测结果绘制荧光强度 (F) 对浓度 (c) 的曲线。 4. 待测液 VB2 含量的测定及数据处理 2 五、实验结果及数据处理 ex ＝442nm λ