HPLC法测定大蒜中蒜氨酸和大蒜素的含量_张民.docVIP

食品与发酵工业FOOD AND F ERMENTATION INDU STRIES 156 2009Vo l 135No 12(T o ta l 254 HPLC 法测定大蒜中蒜氨酸和大蒜素的含量 * 张民,陈倩娟,刘玉柱,秦培军 (天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457 摘 要 建立了大蒜中大蒜素和蒜氨酸含量测定的H P LC 法。结果表明:蒜氨酸的测定条件为,YMC 2Pack ODS 2A C 18(25cm @416mm色谱柱,流动相为20%甲醇,流速017mL/m in,检测波长214nm;大蒜素的测定条件为,YMC 2P ack ODS 2A C 18(25cm @416mm色谱柱,流动相为85%甲醇,流速018mL/min,检测波长214nm;蒜氨酸和大蒜素的平均回收率分别为,8919%?116%和8712%?113%,精密度(RSD分别为1102%和1146%;大蒜中蒜氨酸和大蒜素的含量分别为,1167%和0193%。关键词 高效液相色谱,蒜氨酸,大蒜素 第一作者:博士,副教授。 *天津市科技计划项目课题(07ZCKFNC01800 收稿日期:2008-10-22,改回日期:2009-01-13 大蒜为百合科葱属植物生蒜的鳞茎,是1种重要的药食两用植物,有/天然抗生素0之称。中国是世界大蒜的主要产区之一,年产量400万t,居世界首位,约占世界总产量的40% [1] 。据统计,日本和东南亚 市场上80%的大蒜由我国生产。 蒜氨酸是大蒜中的主要生物活性物质之一 [2,3] , 是大蒜中独特的非蛋白类含硫氨基酸,具有清除自由基、降血糖、抗肿瘤、保肝、抑制亚硝氨合成与吸收、抗血小板聚集等多方面的生物活性,用于食品保鲜可延长食品防腐保鲜期,且无毒性反应[4]。新鲜大蒜中蒜氨酸和蒜酶处于大蒜细胞的不同部位,蒜氨酸以稳定的形式存在于细胞质中,而蒜酶则存在于液泡中,当大蒜受外力作用,细胞被破坏,蒜酶则同蒜氨酸接触,发生酶解反应,产生大蒜素。大蒜素同样具有多种生物活性,并得到了广泛应用。本文旨在建立1种快速方便的蒜氨酸和大蒜素的高效液相检测方法。 1 材料与方法 111 材料与仪器11111 材料与试剂 新鲜大蒜:购于天津乐购超市;蒜氨酸(纯度90%:Fluka 公司;大蒜素(纯度90%:中国药品生物制品检定所;甲醇:色谱纯;其余试剂均为分析纯。11112 主要仪器 LabAlliance 525高效液相色谱仪(美国兰博公司;LWMC-205可调功率微波化学反应器(南京陵 江科技开发有限责任公司;MR23i 高速冷冻离心机(法国Jouan 公司;CJ-5002A 型榨汁机(佛山市顺德区亿龙电器科技有限公司。 112 实验方法 11211 蒜氨酸和大蒜素标准溶液的配制 精确称取一定量的蒜氨酸标准品,溶于流动相,定容,制成4124mg/mL 的标准储备液。再分别配制成浓度为20315、40710、67814、101716、150010、21210L g/mL 的标准溶液。 精确称取一定量的大蒜素标准品,溶于体积分数85%的甲醇溶液,定容,配成1200L g/mL 的标准储备液,再分别配制成24、96、120、144、168、192、216、240L g/mL 的标准溶液。11212 色谱条件 色谱柱:YMC-Pack ODS-A C 18(25cm @416mm;蒜氨酸流动相为V (甲醇B V (水=20B 80,流速017mL/min,检测波长214nm,进样量20L L;大蒜素流动相为V (甲醇B V (水=85B 15,流速018mL/min,检测波长214nm,进样量20L L 。11213 大蒜供试液的制备 (1蒜氨酸。称取去皮的新鲜大蒜20g,加200mL 的蒸馏水,90e 水浴加热灭酶30min,粉碎,静置20min,100e 水浴灭酶40min,冷冻离心40min,取上清液1mL,加1mL 流动相,混匀过膜,得样品1,待测。 (2大蒜素。称取20g 大蒜,将其在甲醇中破碎,用细胞粉碎机粉碎,甲醇定容到100mL,4e ,9000r/min 冷冻离(心,取上清液1mL 加215mL 流动相,混匀过膜,得样品2,待测。 分析与检测 2009年第35卷第2期(总第254期 157 2 结果 211 蒜氨酸、大蒜素标准品和样品的HPLC 图 蒜氨酸和大蒜素色谱图见图1。蒜氨酸的保留 时间为31653min,大蒜素的 保留时间为111122min 。样品1为测定大蒜中蒜氨酸的色谱图,样品2 为测定大蒜中大蒜素的色谱图。 A-蒜氨酸标样;B-样品1;C-大蒜素标样;D-样品2 图1 蒜氨酸、大蒜素标样及样品H PLC 图 212 蒜氨酸和大蒜素的标准曲线 取11211蒜氨酸标准溶液分别进样,记录峰面积。以峰面