11.原核生物基因表达的调控.pptVIP

1984年，Mizuno和Iwoue在研究大肠杆菌外膜蛋白时首次发现了反义RNA。在E. coli中，有两种外膜蛋白ompC和ompF，分别由ompC和ompF基因编码。当渗透压增加时，ompC含量增加，ompF含量减少。当渗透压下降时，ompC含量减少，ompF含量增加。EnvZ基因编码渗透压感受器的受体蛋白，负责感受环境中渗透压的变化。当渗透压增加时，EnvZ激活ompR的产物（一种正调控蛋白），进而激活ompF和调节基因micF的转录。micF RNA长174nt，称为micRNA，和ompF的 RNA的5-端有70%的序列互补，通过互补结合阻止ompF的翻译。当渗透压增加时，会导致micF RNA的合成，从而关闭了ompF mRNA的翻译，因此在体外micF RNA可以抑制ompF mRNA的翻译。 反义技术是通过人工合成和生物合成获得的寡核苷酸片段，长度多为15～30个核苷酸，包括反义RNA、反义DNA及核酶（Ribozyme），它的基础是通过碱基互补原理，干扰基因的解旋、复制、转录、mRNA的剪接加工，乃至输出和翻译等各个环节，从而调节细胞的生长和分化。因此，反义RNA是使原癌基因失活的有效疗法，有望成为基因治疗癌症的方法之一。另外，反义核酸作为基因治疗药物之一，与传统药物相比具有诸多优点，比如高度特异性。反义核酸药物通过特异的碱基互补配对作用于靶RNA或DNA，犹如“生物导弹”。反义核酸是一种携带特定遗传信息的信息体，碱基排列顺序可千变万化，不可穷尽，是最合理的药物设计，可直接阻止疾病基因的转录和翻译。目前反义核酸尚未发现其有显著毒性，尽管其在生物体内的存留时间有长有短，但最终都将被降解消除，这避免了如转基因疗法中外源基因整合到宿主染色体上的危险性。 11.5.4 蛋白质合成的自体调控 翻译水平的自体调控是指一个基因的表达产物蛋白质或者RNA反过来控制自身基因的翻译表达。这种调控的机制即通过阻遏蛋白与mRNA 的特定区域结合，阻止核糖体识别区以达到阻遏翻译的功能（图11-15）。这是一种和转录调控类似的形式，在翻译水平进行调控的是核糖体蛋白。无论编码区的起始位点是否对核糖体有利，调节分子直接或间接地决定翻译起始。自体调控的特点是每个自体调控专一，调控蛋白只作用于负责指导自身合成的mRNA。下表列举的是与mRNA起始区结合，抑制翻译的阻遏蛋白。 阻遏蛋白 靶基因 作用位点 R17 外壳蛋白 R17复制酶 核糖体结合位点的发夹结合 T4 RegA T4早期mRNA 含有起始密码子的各种序列 T4 DNA 聚合酶 T4 DNA 聚合酶 SD序列 T4 p32 基因32 单链5前导序列 表11-1 阻遏蛋白的作用靶点 组成核糖体的蛋白质共有50多种，它们的合成需要严格保持与rRNA相适应的水平。当有过量核糖体游离蛋白质存在时，即引起它自身以及有关蛋白质合成的阻遏，这种在翻译水平上的阻遏作用称为翻译阻遏。对核糖体蛋白质起翻译阻遏作用的调节蛋白质均为能直接和rRNA相结合的核糖体蛋白质，由于能和自身的mRNA起始控制部位相结合，所以可以影响翻译的进行。例如，在L11操纵子中，起调节作用的为第二个蛋白质L1，能与多顺反子mRNA的第一个编码区（L11）的起始密码子邻近的部位结合，从而阻止核糖体起始翻译。 核糖体蛋白质与rRNA的结合部位同编码核糖体蛋白的mRNA的结合部位有同源性，某些核糖体蛋白的mRNA其部分二级结构与rRNA的部分二级结构相似，二者都能与核糖体蛋白质相结合，只是rRNA的结合能力强于mRNA。然而，一旦rRNA的合成减少或停止，游离的核糖体蛋白开始积累，就会与本身的mRNA结合，阻断自身的翻译，使核糖体蛋白质的合成和rRNA的合成几乎同步地停止。但rRNA的合成是在转录层次的调节，而核糖体蛋白质的合成则是在翻译层次的控制。 核糖体结合保护降解法可以测定mRNA 上核糖体起始蛋白质合成的部位。在抑制多肽链伸长的条件下，当翻译起始时，核糖体与mRNA的结合位点已形成稳定的复合体，于是加入核酸酶使未与核糖体结合的 mRNA的区段降解，而有核糖体结合区域则受到保护。在细菌中受核糖体保护的起始序列约35～40nt，其中包含起始密码子AUG。在起始密码子上游约4～7个核苷酸之前的SD序列与16S rRNA序列互补的程度，以及从起始密码子AUG到嘌呤片段的距离也都强烈地影响翻译起始的效率。不同基因的mRNA有不同的SD序列，它们与16S rRNA的结合能力也不同，从而控制着单位时间内翻译过程中起始复合物形成的数目，最终控制着翻译的速度。 大肠杆菌有7个操纵子与核糖体蛋白质合成有关。从这些操纵子转录