真菌感染和实验室诊疗进展.ppt

显微镜特征—酵母相 可见关节孢子，圆形、椭圆形及两端钝圆有横隔的长形酵母细胞 荚膜组织胞浆菌（Histoplasma capsulatum） 属于双相型真菌 有两个变种，即荚膜组织胞浆菌荚膜变种（H.capsulatum var. capsulatum）和荚膜组织胞浆菌杜波变种（H. capsulatum var.duboisii） 可引起组织胞浆菌病(histoplasmosis) 在北美和拉丁美洲的一些特定区域流行 显微镜特征 真菌感染的非培养诊断 非培养诊断检测方法 G试验检测b-1,3 –D-葡聚糖 ELISA法检测曲霉抗原 乳胶凝集试验检测新生隐球菌抗原 ELISA法检测念珠菌抗原 PCR_真菌通用引物、种属特异性引物 方法：G试验 β-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 - b-1,3-D-葡聚糖通过激活G因子（ Factor G）引起凝集； 内毒素通过激活C因子（Factor C）引起凝集； 试剂盒: 祛除Factor C ?葡聚糖特异 β-1,3-D-葡聚糖 检测范围 不仅可检测念珠菌感染 曲霉、镰刀菌 和很多霉菌均存在β-1,3葡聚糖( Miyazaki, J Clin Micro 33:3115, ‘95) 隐球菌细胞壁为alpha-葡聚糖,故为阴性 阳性结果只能代表存在侵袭性真菌感染,不能确定种类 假阳性: 纱布，某些血液透析的滤过器等 Clin Infect Dis 2004;39:199-205 侵袭性真菌感染中葡聚糖检测 AML, MDS Receiving antifungal prophylaxis Cut off 60 pg/ml Clin Infect Dis 2004;39:199-205. 30 30 with candidemia control subjects 侵袭性真菌感染的葡聚糖检测 Fungitell? assay 检测曲霉半乳甘露聚糖抗原的 EIA 方法（Platelia） 检测位于曲霉细胞壁上的 galactomannan,（GM） 3. Detection – avidin-enzyme + substrate 2. Detecting Ab – anti-galactomannan [biotin conjugated] Ag – blood, urine, BAL 1. Capture antibody – monoclonal anti - galactomannan Specificity = 90% sensitivity = 75% Platelia Aspergillus EIA – 结果判断 曲霉的GM 抗原检测 乳胶凝集试验（Pastorex?） (15ng/ml) 酶连免疫吸附试验（Platelia?） (1ng/ml) 灵敏度（%） 特异度（%） LA 25-70 90-100 ELISA 50-90 80-90 Sabetta et al. JID 1985; 152: 946 Ansorg et al. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1994; 13: 582 Verweij et al. JCM 1995; 33: 3150 Maertens et al. Blood 2001; 97: 1604 Herbrecht et al. J Clin Oncol 2002; 20: 1898 GM 抗原 GM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断 与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。 检测方法有ELISA、放射免疫分析（RIA）和乳胶凝集试验等。 Platelia试剂盒采用ELISA方法，敏感性~80%，特异性80%。儿童假阳性10%。 Cut-off值影响结果—0.5:早期诊断,特异性差;1.5:特异性提高。可动态观察。 Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berlin 曲霉感染检测的影响因素 半乳甘露聚糖在血中存在时间短，建议： —高危人群每周至少检测2次，动态观察 —结合影象学、培养结果综合分析诊断 假阴性 假阳性 哌拉西林/他唑巴坦 与其它细菌或真菌成分有交叉反应 肠道中定植的曲霉释放GM进入血液循环 含有谷物的食物中存在GM抗原，通过受损肠黏膜进入血循环导致抗原血症，化疗后出现严重黏膜炎的更易发生 检测真菌DNA的PCR试验 标本： 全血 血清 活检组织 BAL CSF 不同方法： ? DNA 提取