CN102648698A一种梨茎尖组织培养快速繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN102648698A* (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 102648698 A (43)申请公布日 2012.08.29 (21)申请号 201210162238.5 (22)申请日 2012.05.23 (71)申请人 南京农业大学 地址 210095 江苏省南京市玄武区卫岗1 号 (72)发明人 张绍铃 薛亚男 齐开杰 陶书田 吴俊 (74)专利代理机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 代理人 徐冬涛 傅婷婷 (51)Int.Cl. A01H 4/00 (2006.01) 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 权利要求书1 页 说明书3 页 附图1 页 (54)发明名称 一种梨茎尖组织培养快速繁殖方法 (57)摘要 本发明属于植物细胞工程技术领域，公开了 一种梨茎尖组织培养快速繁殖方法。本发明采用 1/2MS 为基本培养基，在对外植体消毒之后，依次 经过芽的诱导、丛生芽的增殖培养与继代、以及生 根培养，获得再生植株。本发明的方法操作简单， 取材方便，成本低，可以在短时间内获得大量遗传 性状一致的无性系繁殖苗，有效地解决梨自根苗 快繁的技术问题，同时也为梨遗传转化奠定了基 础，具有重大的实用价值。 A 8 9 6 8 4 6 2 0 1 N C CN 102648698 A 权 利 要 求 书 1/1 页 1. 一种梨茎尖组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤： 1）外植体的准备：取带芽枝条剪成单芽茎段，消毒后去除鳞片，切取裸芽接种于 诱导培养基上；所述诱导培养基成分为 1/2MS+6-BA 0.8~1.2mg/L+IBA 0.05~0.3mg/ L+GA1.0~3.0mg/L+20~35g/L 蔗糖+3~10g/L 琼脂，培养基pH 值为5.8-6.0 ； 2）丛生芽的诱导：在诱导培养基培养10~20d 待芽长到0.5~3cm，切取新梢转接到新的 诱导培养基上，30-40d 新芽形成并生长，每3 周在相同的培养基上继代1次，50~70d 获得大 量丛生芽；培养过程中，光照强度1500-2000lx，光照15~18h/d，温度25-28℃； 3）继代培养：采用继代培养基进行丛生芽继代培养，每30-40d 继代增殖1 次；培 养条件为：光照强度 1500-2000lx，光照16h/d，温度25-28℃；所述丛生芽继代培养基为 1/2MS+6-BA1.5mg/L+IBA 0.05~0.3mg/L+20~35g/L 蔗糖+3~10g/L 琼脂，培养基pH 值为 5.8-6.0 ； 4）生根培养：切取1-1.5cm 生长健壮的新梢转接到生根培养基上，暗处理5d 后再转 光下培养，培养50-60d 得到生根苗；培养条件为：光照强度1500-2000lx，光照16h/d，温度 25-28℃；所述生根培养基为1/2MS+IBA0.3~1.0mg/L+50~70g/L蔗糖+3~10g/L 琼脂，培养基 PH 值为5.8-6.0。 2. 根据权利要求1所述的一种梨茎尖组织培养快速繁殖方法，其特征在于1）外植体的 准备：将带芽枝条剪成单芽茎段，用洗衣粉漂洗，再用自来水冲洗30min，而后在超净工作 台上用75% 的酒精消毒20s，再用0.1% 的升汞溶液消毒8-10min，最后用无菌水冲洗4-5 次。 用解剖刀去除鳞片，切取裸芽接种于诱导培养基上；所述诱导培养基成分为 1/2MS+6-BA 1.0mg/L+IBA0.2mg/L+GA 2.0mg/L+30g/L 蔗糖+