生物技术制药--酶工程制药.ppt

核酶与蛋白质酶的比较 蛋白质酶的一级结构比核酶复杂 蛋白质酶具有一定空间构象，酶的活性中心具有刚性，核酶不具备 蛋白质酶的活性中心由氨基酸组成，核酶的活性中心是金属离子 核酶可以既是催化剂又是底物，蛋白酶只是催化剂； 核酶可以传递遗传信息，蛋白酶不可以 I型内含子 剪接型核酶 mRNA前体自我拼接 II型内含子 内切核酸酶+连接酶 锤头核酶 剪切型核酶 发夹核酶 丁型肝炎病毒（HDV)核酶 RNA切割 蛋白质-RNA复合酶 2. 核酶的分类 （三）核酶在医药领域的应用 核酶治疗疾病的原理 核酶的给药途径 外源性给药：直接将抗核酸酶降解的核酸注射到组织或细胞内。 内源性给药：利用基因疗法，借助逆转录病毒载体和腺伴随病毒运送核酶 核酶的给药途径 核酶在医学上的应用 展望 二、脱氧核酶（deoxyribozyme ） 利用体外分子进化技术合成的一种具有催化功能的单链DNA片段，具有高效的催化活性和结构识别能力 对于脱氧核酶的研究有望成为基因功能研究、核酸突变分析、治疗肿瘤、对抗病毒及肿瘤等疾病的新型基因治疗药物的新型核酸工具酶。 核酶/脱氧核酶面临的问题 三、抗体酶（abzyme） （一）抗体酶的概念与特点 1. 抗体酶/催化抗体（catalytic antibody） 利用酶反应中底物过渡态类似物作为半抗原刺激免疫系统所产生的一类能够专一识别和催化酶反应中的底物反应过渡态的一类单克隆抗体，本质上是一类具有催化活性的免疫球蛋白。 2. 抗体酶的特点 相同点：都是蛋白质，都有特异性。 不同点： 1）抗体无催化活力，酶有催化活力。 2）酶是能与反应过渡态选择结合的催化物质，抗体是和基态紧密结合的物质。 3）酶的活性和合成受到代谢调节，抗体只有在抗原存在时才产生。 抗体与酶的异同： 酶的催化在于能结合底物产生过渡态，降低能障（反应的活化能）。 以过渡态类似物作为半抗原，诱导与其互补构象的抗体，使其具有催化活性，可观察到抗体催化相应底物发生化学反应。 直接免疫动物/杂交瘤技术/基因工程技术 3. 抗体酶的制备方法 （1） 诱导法——动物免疫技术+杂交瘤技术 利用底物过渡态类似物制备抗体酶示意图 原理：掌握现有单克隆抗体的抗体结合部位的氨基酸顺序的基础上，对编码抗体酶结合部位的基因碱基序列进行定点突变，在结合部位换上有催化作用的氨基酸残基，进而改变抗体酶的催化效率。 噬菌体抗体库技术/噬菌体展示技术 （2） 基因工程法 （1） 前药的设计和活化 抗肿瘤药物：喜树碱、阿霉素、依托泊苷 4. 抗体酶的应用 （2） 疾病治疗 治疗可卡因上瘾 有机磷中毒 甲状腺疾病 肿瘤治疗 抗体介导前药治疗(ADEPT)： 向体内注射能够与肿瘤组织特异性结合的抗体酶，当其结合到靶部位后，再注入前药，当药物扩散至肿瘤细胞表面或附近时，抗体酶可快速将其水解并释放出抗肿瘤药物，从而提高局部药物浓度，实现靶向治疗。 催化抗体38C2 戒毒 阻断可卡因、鸦片和受体的结合 可卡因水解的过渡态类似物——磷酸单酯 单克隆抗体酶15A10：在可卡因到达作用位点前将其降解，从而降低其毒性 （1） 应用 有机合成中的应用 基础理论研究 在医疗上的应用 5. 抗体酶的发展前景 （2） 待解决问题 催化效率 抗体酶筛选 抗体酶专一性 底物抑制 催化基团的最适装配 四、有机相的酶反应 （一）有机相酶反应的特点 有利于疏水性底物的反应 可提高酶的热稳定性，提高反应温度加速反应 可改变反应平衡移动方向 可改变底物专一性 可防止由水引起的副反应 酶易于实现固定化 酶和产物易于回收 可避免微生物污染 （二）有机相酶反应具备条件 保证必需水含量。 选择合适的酶及酶形式。 选择合适的溶剂及反应体系。 选择最佳pH值。 四、有机相的酶反应 （三）有机相酶反应的溶剂体系 单相共溶剂体系（水-水溶性溶剂均相体系） 两相体系（水-水不溶性溶剂两相体系） 反相胶束体系 低水有机溶剂体系（单相有机溶剂体系） 四、有机相的酶反应 （四）有机相酶工程的应用 手性药物的拆分 手性高分子聚合物的制备 多肽的合成 甾体转化 五、突变酶（mutational enzyme） 在已知酶的结构与功能的基础上，有目的地改变酶的活性位点或基团，从而产生具有新性状的突变酶。