《分子遗传学》第6章转录后加工.ppt

三． I类内含子的剪接 Cech等1981年用四膜虫分离得到了35S的前体rRNA，它含有一个长413bp的内含子。 此35S rRNA要加入一价或二价阳离子及GTP就可以在体外释放出413b的线性的内含子， 若继续保温，那么线形内含子又可形成环状的RNA。这就意味着35S RNA在GTP的作用下可以自我剪接。 (一)I类内含子的结构特点是 1. 其边界序列为5′U-G 3′； 2. 具有中部核心结构（Central core strucature） 3.内部引导顺序（internal guide seguence IGS） (二) I类内含子的剪切机制 转酯反应(transesterification)： 酯键从一个位置转移到另一个位置。 四. Ⅱ类内含子的剪接 (一)结构特点 (1) 边界序列为5′↓GUGCG……YnAG↓； (2) 有6个茎环结构；有分支点顺序（branch-point seguence） (二)剪接机制 无需鸟苷的辅助，但需镁离子的存在。 分枝点A的2′-OH对5′端交界处的磷酸二酯键发动亲核进攻，产生了套索（lariat）结构（图13-31）； 切下的外显子1其3′-OH继续对内含子3′端的交界序列进行亲核进攻，同时释放出套索状的内含子。 五. 核mRNA的剪接 (一) 结构特点： 1. 边界顺序:符合GU-AG法则。 2. 分枝点顺序：为Py80NPy87Pu75APy95其中A为百分之百的保守，且具有2′-OH。 3.内含子5′端有一保守序列可以和U1 snRNA的5′端的保守顺序互补 (二)剪接机制 剪接因子 snRNPs U1,U2,U5和 U4/U6。 第四节 编辑 编辑的发现 编辑（editing）是指转录后的RNA在编码区发生碱基的加入，丢失或转换等现象。 1986.R.Benne在研究锥虫线粒体mRNA转录加工时发现m RNA的多个编码位置上加入或丢失尿苷酸，1990年在高等动物和病毒中也发现了编辑现象。 编辑的生物学意义： (1)校正作用； (2)调控翻译； (3)扩充遗传信息。 编辑的调控作用 线虫coxII 基因的编辑 二．编辑的机制 1990年L.Simpsom等发现指导RNA（guide gRNA）。 第六章 转录后加工 转录后的加工（posttranscriptional modification） （1）减少部分片段：如切除5′端前导序列，3′端拖尾序列和中部的内含子； （2）增加部分片段：5′加帽，3′加poly(A)，归巢和通过编辑加入一些碱基； （3）修饰：对某些碱基进行甲基化等。 第一节 tRNA和rRNA的加工 一. 原核的 tRNA和 rRNA的加工 参与蛋白质合成的tRNA和rRNA都不是最初的转录产物 (1) 它们的5′端都是单磷酸，而原始的转 录产物5′应是三磷酸； (2) 分子比初始转录物小； (3) tRNA含有特殊的碱基，这些碱基只有通过一些化学修饰才可以得到。 (一) tRNA的加工 tRNA的加工分成3个阶段 (1) “斩头”，形成5′末端； (2) 去尾，形成3′-OH末端。 (3)修饰：通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等进行修饰，如氨基酸臂的4-硫尿苷（4tu），D臂的2甲基鸟苷（2mG），TψC臂的假尿苷（ψ）和反密码子环上的2异戊腺苷（2ipA) (二) rRNA的加工 二 真核的tRNA和rRNA的加工 真核tRNA的基因和原核不同： (1)真核的前体分子tRNA是单顺反子，但成 簇排列，基因间有间隔区； (2)真核tRNA基因一般都比原核tRNA基因多 得多，如酵母约有400个tRNA基因； (3) 5′端单磷酸核苷酸，表明已被加工过； (4) tRNA的前体分子中含有内含子。 酵母tRNA的加工主要分成两个步骤： 切除内含子 连接外显子 真核tRNA内含子切除的特点： (1)没有交界序列，也没有内部引导序列； (2)剪切反应的信号是二级结构，而不是 一 级结构； (3)是依赖于蛋白质性的RNase，而不是核 糖拟酶或snRNP； (4)反应的本质不是转酯反应。 (1) 切除5′端的前导序列； (2) 从41S的中间产物中先切下18S的片段。 Hela细胞的切点在18S和5.8S之间的ITS（内部转录间隔序列）； L细胞的切点在 18S序列和ITS的交界处，称为先成熟。 (3) 部分退火，形成发夹结构； (4) 最后修正。 真核细胞中rRNA的加工途径 第二节 前体mRNA的加工 mRNA前体分子的加工主要是真核mRNA，