第2章-核酸化学.pptVIP

第二章 核酸化学;第一节 概述;“格里菲斯之谜”; R型菌 S型菌 ;S型细菌被杀死;;1944年，加拿大生物化学家艾弗里在实验中发现：死去的S型菌并未复活，而是S型菌的DNA进入了R型菌，使其转化为新的S型致病肺炎双球菌。在世界上第一次证明基因就在DNA上。 ;分离S型死菌的提取液→分别检测各分离组分（蛋白质、类脂、多糖、RNA和DNA）的转化活性→只有DNA具有转化因子活性;核酸的分类;元素组成 核酸的基本结构单位——核苷酸;核酸的分子组成;核酸的基本结构单位——核苷酸;核酸 ;核苷酸;一 碱基;嘌呤(purine) ;嘧啶(pyrimidine);二、 戊 糖;三 、核苷;核苷酸： AMP, GMP, UMP, CMP 脱氧核苷酸： dAMP, dGMP, dTMP, dCMP ;DNA与RNA结构相似，但在组成成份上略有不同：;五 多核苷酸的连接及表示方式;5’磷酸端：在多核苷酸链中，一端核苷酸的5’磷酸未形成磷酸二酯键，称～，或5’末端。 3’羟基端：另一端核苷酸3’羟基未被酯化，称为～，或3’末端。;;核酸结构的表示方式：;互补链;第三节 DNA分子的结构与功能;二 DNA的二级结构——双螺旋结构;（一）DNA双螺旋结构的研究背景;（二） DNA双螺旋结构模型要点 （Watson, Crick, 1953）;（二） DNA双螺旋结构模型要点 （Watson, Crick, 1953）;（二） DNA双螺旋结构模型要点 （Watson, Crick, 1953）;Watson和Crick所提出的模型称为B-DNA。 ;碱基互补配对 ;三 DNA三级结构;染色体的基本单位是核小体(nucleosome) 核小体：由DNA和组蛋白共同构成。;第四节 RNA的结构与功能;RNA的结构特点;RNA局部形成“发卡”结构; RNA一级结构;一 信使RNA;* mRNA结构特点;;3 编码区：mRNA有编码区和非编码区，编码区是所有mRNA分子的主要结构部分，决定蛋白质分子的 一级结构。非编码区与蛋白质生物合成调控有关。;二 转运RNA;* tRNA的二级结构 ——三叶草形 氨基酸臂 DHU环 反密码环 额外环 TΨC环;在三叶草型二级结构的基础上，突环上未配对的碱基由于整个分子的扭曲而配成对，目前已知的tRNA的三级结构均为倒L型;三 核糖体RNA;核糖体;RNA分类及特点;第五节、核酸理化性质; 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，一般在260nm左右有最大吸收峰，作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。;三 核酸的变性、复性与杂交;增色效应：天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260 nm)值升高, 即～。 粘度降低 沉降速度增加;Tm ：随DNA变性增加，260nm处的紫外光吸收值逐渐增加，该值达到最大值50％时的温度称为核酸的解链温度或变性温度，用“Tm” 表示融解温度。 ;Tm值影响因素： 1 与分子中的G和C的含量有关。G和C的含量高，Tm高（因G- C之间有三个氢键，A-T有两个氢键，故G-C较A-T稳固）。 2 与核酸分子长度有关，核酸分子越长，解链时所需能量越高，Tm值越大。;复性：变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为～。;不同来源的DNA、DNA与RNA、RNA和RNA之间都可以发生杂交。;核酸的杂交的应用： 在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。 临床诊断： 基因诊断：如地中海贫血、分子病等 遗传病的产前诊断：胎儿羊水中收取DNA 基础研究领域： PCR技术、Southern杂交、Northern杂交;思考题;谢 谢