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河南省重点研发计划项目申报书 课题题目为：琼脂糖自组装膜基底型免疫芯片载体制备及抗体固定研究 项目内容摘要： 研究意义： 为了提升免疫芯片对抗体的固定效率， 建立多糖纳米膜基底型芯片载体制备的新 方法，为后 续免疫芯片的制备提供实验参考和理论支持。 研究内容：本文选择多糖中水溶性的琼脂糖为基质，利用分子自组装技术，以玻片为载体， 让琼脂糖、 高碘酸钠对玻片表面进行修饰，制备琼脂糖自组装膜载体。利用 SEM、AFM和 FTIR 对载体进行表征，获 得最佳制备条件；利用荧光显微成像及 ImageJ 软件，研究该载 体对 2 种不同种属来源抗体的固定效率，对 琼脂糖自组装膜载体和普通醛基修饰载体对抗 体的固定效果进行对比分析。 关键字 琼脂糖 ; 免疫芯片 ; 抗体固定 项目概况 1、主要研究开发内容 选择多糖中水溶性的琼脂糖为基质，利用分子自组装技术，以玻片为载体， 让琼脂糖、高碘酸钠对玻片表面进行修饰， 制备琼脂糖自组装膜载体。 利用 SEM、 AFM和 FTIR 对载体进行表征，获得最佳制备条件；利用荧光显微成像及 ImageJ 软件，研究该载体对 2 种不同种属来源抗体的固定效率， 对琼脂糖自组装膜载体 和普通醛基修饰载体对抗体的固定效果进行对比分析。 材料：琼脂糖、 3- 氨基丙基三甲氧基硅烷 ( APTES) ( Sigma 公司，美国 ) ， 高碘酸钠、戊二醛、 36%冰乙酸、无水乙醇等均为分析纯 ( 国药集团化学试剂有 限公司 ); FITC 标记的驴抗兔抗体 ( 上海生工 ) ，FITC 标记的兔抗人 AFP抗体 ( 上 海生工 ) 。 器械：超纯水机、电子天平、磁力搅拌器、烘干箱， JSM-6360LV 型高低真 空扫描电镜， FTS3000FX型的傅立叶变换红外光谱仪， OLYMPUS BX51型倒置荧 光显微镜， Nanoscope IIIa 型原子力显微镜。 基片的预处理： 25 mm×75 mm光学载玻片用氨水洗液 ( 体积比为氨水∶过氧 化氢∶水 = 1 ∶1 ∶5) 置摇床上振摇 2 h，取出后用超纯水清洗干净，放入 1mol /L HCl 中浸泡过夜，再用超纯水超声 10 min，无水乙醇超声清洗 2 次，每次 5 min， 置电热恒温箱 (120 ℃ ) 烘烤 2 h 。 实验组琼脂糖自组装膜载体制备，对照组进行普通醛基载体制备。 基片表面抗体探针的固定，测定观察载体表面荧光探针的固定效率。 2、主要技术和经济指标（限 1000 字） 主要技术： 琼脂糖自组装膜载体制备①分别配制 0. 6% 、0. 8% 、1. 0% 、1. 2% 、1. 4% 的琼脂糖溶液，微波炉煮沸 3 min 完全溶解 ; ②将 2 ml 琼脂糖溶液覆盖在 60℃预热的清洁玻片上 ; 琼脂糖室温凝固后，置 37℃烤箱烘干 2 h; 置室温保 存备用 ; ③将上述制备好的琼脂糖玻片置于 50 mmol /L NaIO4 溶液中室温下活 化 60 min 。接着用 0. 1 mol /L pH7. 4 PBS 洗涤 5 min ×3 次，氮气流吹干。 河南省重点研发计划项目申报书