尼氏染色步骤.docxVIP

小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？ 焦油紫染液的配制： 焦油紫/0.1g 蒸馏水/99ml 1%冰醋酸 1ml 冰冻切片氯仿中 1 分钟； 无水酒精中 1 分钟； 95%酒精、70%酒精各 1 分钟，蒸馏水洗片刻； 进入焦油紫染液染色 30 分钟（37 度温箱中染色 10 分钟），蒸馏水洗涤； 95%酒精分色； 常规脱水、透明、封片。 尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。 研究脊椎动物中枢神经系统的细胞构筑学,最常用的方法是神经细胞染色,也称尼氏染色.虽然碱性染料都 可用于中枢神经系统染色,但常用的有以下几种: 焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇. 甲苯胺蓝属于人工合成的醌亚胺类碱性染料，有两个发色团，一个是亚胺基(- N =), 另一个是醌基，同 类的有硫堇、亚甲兰，次甲基紫 、中性红、焦油紫等；因为是碱性燃料，多作为细胞核染色剂－－细胞 核中的核酸含有酸性物质对碱性燃料有亲和力，称之为“嗜碱性”。 硫堇染液(工作液) 干液(硫堇)：硫堇 1g 或 2g 溶于 100mL 50%乙醇中，溶解后过滤备用； 醋酸钠缓冲液：醋酸钠·3H2O 9.7g，巴比妥钠 14.7g，溶于 500mL 蒸馏水中； 0.1 mol／L 盐酸； 按①：②：③=40：28：32 比例配成混合液，调 pH5.7±0.2，即得硫堇工作液。 尼氏体又称虎斑,是神经细胞的一种特殊结构,具有嗜碱性的特点易被碱性染料,如焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇 等着染.受染后呈块状(形如虎斑)或粒状.尼氏体分布在神经细胞除轴突之外的细胞质中,核周围颗粒较大 , 近边缘处较小而细长.尼氏体还可因生理状态的改变而变化,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映出神 经细胞旺盛的功能状态;在神经元受损伤时尼氏体的数量可减少甚至消失 .因此取材时应尽量获取新鲜材 料才能制作出满意的标本. mickeyzq wrote: 焦油紫染液的配制： 焦油紫/0.1g 蒸馏水/99ml 1%冰醋酸 1ml 冰冻切片氯仿中 1 分钟； 无水酒精中 1 分钟； 95%酒精、70%酒精各 1 分钟，蒸馏水洗片刻； 进入焦油紫染液染色 30 分钟（37 度温箱中染色 10 分钟），蒸馏水洗涤； 95%酒精分色； 常规脱水、透明、封片。 尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。 你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊 我用的是 1％的甲苯胺蓝，具体步骤是： 常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入 1％甲苯胺蓝室温下染 3min，自来水冲洗，95％酒精分化， 0.5％伊红复染 1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重， 不知道该怎么改进 换焦油紫看看,焦油紫着色比较深. （二）神经细胞尼氏体染色 正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形， 有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet） 亚甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神 经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。 焦油坚牢紫显示尼氏体 焦油坚牢紫 1g 蒸馏水 100ml *作方法： 切片脱蜡至水 用焦油坚牢紫水溶液浸染 20-30 分钟 水洗 用 95%酒精分化 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶 结果：神经细胞单位：紫-蓝色 细胞核：紫-蓝色 尼氏体：紫-深蓝色 注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。 神经纤维染色 使用说明： 1. 样品处理 a) 对于石蜡切片： 二甲苯中脱蜡 5-10 分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。 无水乙醇 5 分钟。 90%乙醇 2 分钟。 70%乙醇 2 分钟。 蒸馏水 2 分钟 2. 尼氏(Nissl)染色 对于上述处理好的样品： 尼氏(Nissl)染色液染色染色 3-10 分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高 到 37-50℃对于 25-50 微米等较厚 的切片可以使染色更均匀）。 蒸馏水洗涤 2 次(每次数秒钟即可)。 95%乙醇约 5 秒。 此时，如果需要直接观察，可以用 70%乙醇洗涤 2 次。如需脱水、透明后封片按后续步骤 进行，70%乙醇洗涤后仍可按照 后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼 氏(Nissl)染色。 3. 脱水、透明、封片或进行其它染色 a) 脱水、透明、封片： 95%乙醇脱水 2 分钟。 换用新鲜的 95%乙醇再脱水 2 分钟。 二甲苯透明 5