第三章 生物样品制备（四）.ppt

临床色谱质谱实验室检测工作流程-时间占比 临床色谱质谱实验室检测工作流程—出错来源 样品处理 30% 操作者 19% 色谱柱 11% 污染 4% 标准曲线 9% 仪器 8% 样品引入 6% 积分 6% 色谱图 7% 样品制备=样品处理+操作者+污染 大约占到50% 临床色谱质谱实验室检测工作流程-手工与自动分配 小 时 分 钟 小 时 手 工 自 动 手 工 前处理自动化 样本接收 质谱工作站自动将收到的工作清单生成运行列表，自动识别条码后，按顺序进行检测样本 自动样本前处理系统自动按LIS清单生成工作列表，并按顺序、编程进行前处理；并将处理后的样本贴码 技术人员将LIS系统清单导入自动前处理系统 技术人员将工作列表导入LC-MSMS 技术人员对结果进行审核，生成结果列表；并对数据情况进行登记 技术人员将结果列表导入LIS系统，生成结果报告；审核批准 技术人员进行样本接收 技术人员在LIS系统中领取标本，核对并按顺序生成工作清单 技术人员清点标本、对样本进行编号，移取标本到处理管中 技术人员对标本按顺序进行处理 技术人员手动录入工作清单，并将编辑生成仪器运行列表 仪器按照列表对样本进行检测 技术人员对结果进行审核，生成结果列表；并对数据情况进行登记 技术人员将结果列表导入LIS系统，生成结果报告；审核批准 X X X X 前处理自动化 分 钟 小 时 自 动 手 动 自 动 分 钟 自动化样品制备技术 工作原理 基于空气置换原理，通过通道内活塞的移动来推动空气进行吸液和放液。 将单通道移液器组合起来，通过操作系统控制机械臂完成移液过程，探测液面高度，能够快速准确地完成大批量液体的连续转移、分液、稀释、混合、合并等多种液体处理工作的设备。 系统组成 操作平台、机械臂、移液通道、实验用品载架、辅助设备和控制器 （一）离线自动化-自动化液体处理工作站 （一）离线自动化-自动化液体处理工作站 机械臂 试剂槽 操作电脑 一次性吸头 样品盘 * Pros and cons of sample Prep tech. Dilution- no cleanup or enrichment, good, simple, fast, clean high - Centrifugation- good clean up, separates by mass, no enrichment, cumbersome and expensive Filtration- no enrichment, good simple fast clean high detection limits Liquid/Liquid Extraction, Best clean up (multi step), separates by chemical properties, enrichment, cumbersome automate and expensive Solid Phase Extraction-good clean-up, fast , easy to automate, most options-(vendors and products) * 第三章 生物样品制备 《临床色谱质谱检验技术》 一、常用样品制备技术 二、自动化样品制备 主要内容 《临床色谱质谱检验技术》 三、小结与思考 一、常用样品制备技术 液液萃取 稀释 固相萃取 离心 过滤 样品制备技术 蛋白沉淀 临床色谱质谱实验室常用样品制备技术 衍生化 定义 是一种基于液相色谱分离的样品制备方法，依据样品基质各种组分在固定相和流动相间分配系数的不同，使目标分析物得以保留和净化，同时选择性地去除样品基质中的干扰成分。 目的 分离、除去干扰、净化基质和富集目标分析物 （三）固相萃取（solid-phase extraction,SPE） 名称：C18-n（未封端） 基质：硅胶？聚合物基质？ 孔径：60? 粒径：40-75μm 含碳量：12% 表面积：300㎡/g 键合相：碳十八烷基 作用机理：反相萃取 SPE结构 SPE产品形式 针筒形式 过滤嘴形式 96孔板形式 在线 SPE柱 （三）固相萃取 （三）固相萃取 基本操作步骤（以反相萃取为例） SPE配套装置 （三）固相萃取 固相萃取装置（常规） 96孔板正压装置 96孔板负压装置 （三）固相萃取 （三）固相萃取 影响萃取效率的因素——SPE分离模式的选择（与液相色谱柱相似） （三）固相萃取 影响萃取效率的因素——柱的预处理 未预处理 部分预处理 完全预处理 C18 键合硅胶