第六章 色谱质谱技术在临床检验中的应用（一）.pptx

第六章色谱质谱技术在临床检验中的应用;目标 掌握： 1、LC-MS/MS在25-羟基维生素D检测中的应用 2、色谱质谱技术在生化遗传中的应用 3、色谱质谱技术在治疗药物监测中的应用 4、色谱质谱技术在内分泌疾病检测中的应用 熟悉： 1、HPLC在氨基酸检测中的应用 2、ICP-MS在人体微量元素检测中的应用 了解： 1、色谱质谱技术在临床毒理学中的应用 2、质谱技术在蛋白组学和微生物学中的应用;教学形式及学时 教学形式：理论教学+实验 学时：6（理论）+12（实验）;LC-MS/MS在25-羟基维生素D检测中的??用 色谱质谱技术在生化遗传中的应用 色谱质谱技术在治疗药物监测中的应用 色谱质谱技术在内分泌疾病检测中的应用;一、遗传代谢病介绍;一、遗传代谢病介绍;什么是遗传代谢病？;遗传代谢病发病机制;流行病学;遗传代谢病的代谢物分类及疾病;二、临床背景及检测意义;遗传代谢病的临床特点;遗传代谢病的临床特点;遗传代谢病的临床发病特点;遗传代谢病不及时治疗的后遗症;胎儿的生存危险！！！;遗传代谢病的检测意义;新生儿疾病筛查;新生儿疾病筛查;我国新生儿疾病筛查始于20世纪80年代初，首先在上海和北京开展 目前国内大部分筛查单位开展苯丙酮尿症和先天性甲状腺功能减低症两种疾病的筛查 广东和广西两地根据当地疾病谱的特点增加了葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷症（G6PD），南京、无锡和上海部分地区增加了先天性肾上腺皮质增生症（CAH）及G6PD的筛查 广州、杭州、上海等市的新生儿筛查中心均已普及了串联质谱新生儿疾病筛查方案 武汉同济医院、上海新华医院等已开展临床患者串联质谱遗传代谢病检测服务多年;传统遗传代谢病筛查;三、色谱质谱技术在生化遗传中的应用;苯丙酮尿症（PKU) 甲状腺功能减低症(CH) G6PD缺乏症(G6PD);国外串联质谱应用情况;国内串联质谱应用情况;色谱质谱检测 可检测氨基酸代谢病、有机酸代谢病及脂肪酸氧化代谢障碍相关的70余种遗传代谢性疾病。 LC-MS/MS：同时检测106种指标 GC-MS：同时检测132种指标;结果评价;说明： 新生儿以外的对象可以是手指末梢血、静脉血制成的滤纸干血片标本。;血斑小，渗透不均;衍生化前处理方法： 样品处理过程中加入盐酸正丁醇，引入丁基 氨基酸和酰基肉碱经衍生化，形成相应的丁酯，屏蔽酸性基团 酯化作用可减少潜在的溶剂或其他物质干扰，提高离子化效率;氨基酸检测（衍生化前处理） 大多数氨基酸经衍生化反应后均能形成丁基甲酸（m/z 102），因此可采用中性丢失扫描模式进行质谱检测； 某些氨基酸如精氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸、甘氨酸等，经碰撞后产生的中性分子较少，故采用多反应监测模式（MRM）;酰基肉碱检测（衍生化前处理）;数据处理分析 平台期至少10个扫描点，且峰形稳定; TIC响应、内标响应稳定;阴性;GC-MS检测尿液有机酸的流程;GC-MS检测尿液有机酸—样本采集;前处理方法 有机酸萃取法、尿素酶预处理方法 尿素酶预处理法能检测有机酸、氨基酸、糖、醇及嘧啶类等多种代谢产物 有机酸萃取预处理法仅能检测到有机酸 有机酸萃取预处理法对有机酸的检测值及抗干扰性都要高于尿素酶预处理法;前处理方法 有机酸萃取法;气相色谱条件： 色谱柱：DB-5ms（30.0m*0.25mm*1.00μm） 进样口温度： 280℃；载气：氦气，流量：1.06 ml/min，分流比：10:1，进样量：1μL； 升温程序：初始柱温为100℃，保持 4min，4???/min程序升温至280℃，保持11.0min。 质谱条件： EI离子源温度：200℃；接口温度：280℃；溶剂延迟时间：5min； 全扫描方式，质量扫描范围：50-500amu;谱库检索;报告解读——血尿结果分析;报告解读——血尿结果分析;报告解读——血尿结果分析;四、遗传代谢病的治疗和预后;遗传代谢病治疗原则;遗传代谢病治疗原则;治疗 控制天然蛋白质摄入 补充不含相应氨基酸的奶粉 减少旁路代谢产物 器官移植 预后 高苯丙氨酸血症 筛查确诊后及时治疗，几乎不影响发育；不治疗可导致智力落后;有机酸血症的治疗;脂肪酸氧化代谢病;五、小节与思考;遗传代谢病的定义？ LC-MS/MS检测血遗传代谢病的样本类型、前处理方法、仪器检测方法、数据处理分析及疾病诊断？ GC-MS检测尿液有机酸的样本类型、前处理方法、仪器检测方法、数据处理分析及疾病诊断？ ;Thanks