色谱柱技术（二）.ppt

粒径： 1.8μm,2.7μm,5μm,10μm等 物理参数（四）-粒径 粒径越小，柱效越高，分离度越高，但柱压也越高，柱易污染 80?,100?,120?,300?等 化合物需进入孔内，与其表面的键合相相互作用而达到分离， 因此，孔径大小必须和分子大小相匹配 小分子样品 MW ? 2000，使用80?-100?的孔径 大分子样品MW > 2000，通常使用300?（可用于分离蛋白质和多肽） 物理参数（五）-孔径 物理参数（五）-孔径 孔径越大，保留越弱，分离度较低，分析时间越短 孔径越小，保留越强，分离度较高，分析时间越长 是指多孔固体物质单位质量所具有的表面积，一般在180～350m2/g 比表面积与粒径、孔径及含孔率有关； 比表面积大，增加样品的保留和分离度 比表面积小，可以缩短分析时间和梯度时的平衡时间 物理参数（六）-比表面积 比表面积大 比表面积小 化学参数 化学参数（一）-填料基质 化学参数（一）-填料基质-硅胶分类 化学参数（一）-硅胶分类-全多孔硅胶和核-壳硅胶 全多孔硅胶 核壳硅胶 化学参数（二）-键合相 化学参数（二）-键合相-烷基键合相 基本作用模式： 基于分析物与键合相的疏水作用 化学参数（二）-键合相-苯基键合相 基本作用模式： 氢键、π-π作用、偶极-偶极作用、疏水作用等 化学参数（二）-键合相-苯基键合相 苯基的疏水能力没有烷基键合相（C18）强，但提供了独一无二的选择性，它能与芳香性化合 物产生pi—pi作用力，是传统烷基相（C18）重要的互补 当烷基键合相对一些疏水相似的化合物分离不理想时，采用苯基往往取得不同的结果 化学参数（二）-键合相-极性植入与极性封尾 用极性官能团封掉残留的硅醇基，或人为加入极性基团，使得这类固定相带有极性，并与化合物的极性官能团作用 极性封尾 极性植入 极性封尾 化学参数（二）-键合相-极性植入与极性封尾 特点： a.对于一些极性化合物有很强的极性选择性； b.可耐100%的水相，长时间稳定； c.可改善碱性化合物的峰形。 传统的C18柱 极性植入的反相柱 键合相 作用模式 特点 烷基键合相 基于分析物与键合相的疏水作用 疏水性强的固定相比疏水性弱的固定相表现出更好的亚甲基（-CH2-）选择性 苯基键合相 氢键、π-π作用、偶极-偶极作用、疏水作用等 a.苯基的疏水能力没有烷基键合相（C18）强，但提供了独一无二的选择性，它能与芳香性化合物产生pi—pi作用力，是传统烷基相（C18）重要的互补 b.当烷基键合相对一些疏水相似的化合物分离不理想时，采用苯基往往取得不同的结果 极性植入和极性封尾 用极性官能团封掉残留的硅醇基，或人为加入极性基团，使得这类固定相带有极性，并与化合物的极性官能团作用 a.对于一些极性化合物有很强的极性选择性 b.可耐100%的水相，长时间稳定 c.可改善碱性化合物的峰形 化学参数（二）-键合相总结 最通用的固定相是烷基键合相C18，苯基提供了互补于C18的选择性，特别对于 极性芳香性化合物； 极性植入与极性封尾的C18提供了另一个选择性，且不受纯水流动相的限制，同 时增强了极性化合物的分离与保留。 指硅胶表面键合相的比例，不同的键合密度决定了固定相的本质； 高碳载量：保留强，提高分辨率，分析时间长，适用于复杂样品的分析 低碳载量：保留弱，缩短运行时间，适用于简单样品的快速分析 化学参数（三）-碳载量 碳载量高 碳载量低 化学参数（三）-碳载量 * * 添加心脏图 * 为了达到最佳分离,一般要求孔径直径是分子直径的3倍以上 * 并不是比表面积大或者小就更好，选择适合目的的比表面积 * 聚合物基质：化学稳定，应用pH范围宽, 但强度不够大，批重复性相对较差。孔结构复杂, 孔径不均匀，导致柱效不够高, 有机溶剂可能导致聚合物基质溶涨而受损 * * * * * 第二章 色谱技术概论 -色谱柱 《临床色谱质谱检验技术》 一、复习 二、液相色谱柱 三、小结与思考 主要内容 《临床色谱质谱检验技术》 一、复习 《临床色谱质谱检验技术》 气相色谱柱的构造 气相色谱柱最常见的分类 毛细管色谱柱的参数 二、液相色谱柱 《临床色谱质谱检验技术》 五个基本组成系统：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。 液相色谱仪的构造 液相色谱柱 液相色谱柱-构造 柱管（含有填料，柱内壁多经抛光，可 提高柱效，减少管壁效应） 柱头 锥套：用于密封 筛板：用于封堵住填料并使其不被流动相