免疫组化技术-免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用.pptVIP

免疫组化结果的判断原则及 对假阴性和假阳性的认识 ? 一、 免疫组化结果的判断原则 免疫组化具有特异性强、敏感性高及定 位正确等优点，但随着免疫组化应用的普 及和深入，越来越多的问题也随之出现。 因此，掌握对免疫组化结果的判断原则是 很重要的。 ? 1. 必须设染色对照 每批染色都要以特异性的阳性 对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正 确的判断。没有阳性对照，就不能做出真正阴性 结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做 出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫 组化染色，即使做出了判断也是不可信的。 ? 2. 抗原表达必须在特定部位 阳性表达必 须在细胞和组织特定的抗原部位才能视 为阳性，如 LCA 在细胞膜上、 Keratin 在 细胞浆内、 S-100 蛋白在胞浆和胞核内， EMA 在细胞膜上。不在抗原所在部位的 阳性表达一概不能视为阳性。 3. 阴性结果不能视为抗原不表达 即阴性 结果不能认为具有否定意义；阳性表达 有强弱、多少之分，哪怕是只是有少数 细胞阳性（但要在抗原所在部位）也要 视为阳性表达，不能认为个别细胞阳性 而不作阳性看待。 4. 免疫组化与 HE 切片诊断应以 HE 切片 诊断为准 当免疫组化诊断结果与 HE 切 片诊断不一致时，应再结合临床资料、 X 线等影像学及实验室结果综合分析，不 能用免疫组化检查结果推翻 HE 切片诊断。 免疫组织化学技术 西南医院病理学研究所 冯俊明 ? 免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的 一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特 异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合 后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、 同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观 察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确 定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 ? 近十年来，免疫组化技术发展很快，在现代医学 的基础和临床研究中发挥着重要的作用，对疾病， 尤其是对肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机理的研 究提供了强有力的手段，但随着免疫组化标记物 的增多和利用，原为特异的标记物并非绝对特异， 而且出现交叉反应和异常表达的情况日益增多。 故对免疫组化标记结果的意义 不能绝对化 ，应在 光镜观察组织形态的基础上，合理使用免疫组化 技术，审慎判断其标记的意义。 免疫组化标记的形态学特征 ? 免疫组化标记具有形态学特点，若能熟 练掌握则有助于对免疫组化标记结果的 正确判断，现择要分述如下： 一、阳性标记色度特征 ? 免疫组化标记时细胞阳性着色程度取决于抗原含量、分布密 度和标记方法及其敏感性。一般而言，抗原含量越多，分布 密度越高，标记方法越敏感，阳性结果显色则越强。根据阳 性标记的显色程度分为： 淡黄色 ，提示为弱阳性； 棕黄色 ， 为中等度阳性； 棕黑色 ，示为强阳性。在结果判断中，后两 者较有意义，可作为判断依据。而前者除考虑标本处理和方 法学因素外，可能与细胞只有轻度异常表达，或某些细胞摄 取了周围组织抗原之故。 二、阳性标记细胞学特征 ? 免疫组化标记中，阳性标记细胞学特征是反映 抗原在细胞中的定位和分布情况。在诊断中阳 性细胞以拟标记的细胞为前提，阳性表达必须 在细胞特定的抗原部位，若不在抗原所在部位 的阳性表达和非目标细胞即使阳性也不应作为 判断依据。根据抗原在细胞中分布和阳性颗粒 沉淀部位可分为以下 5 种类型： ? 1. 胞膜型 阳性颗粒主要分布于细胞膜表 面，形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细 胞。此类型常见于某些膜抗原，如上皮 膜抗原（ EMA ）、白细胞共同抗原 （ LCA ）及 B 细胞、 T 细胞、粒细胞相关 抗原（ GAA ）和 Ki-1 等。 ? 2. 胞核型 阳性颗粒定位于细胞核，呈均 匀分布或位于核膜下，有的呈小斑块状 不规则分布。此多见于增殖细胞核抗原、 Ki-67 及激素受体中雌激素受体（ ER ）、 孕激素受体（ PR ）和基因 p53 等。 ? 3. 胞浆型 阳性颗粒主要分布于细胞浆。大部分抗 原均属于此种类型，如细胞角蛋白、波形蛋白、结 蛋白、神经丝蛋白、肌红蛋白、 α 1 - 抗胰糜蛋白酶 及前列腺特异性抗原（ PSA ）等。依据抗原在胞浆 内分布形式，通常表现为弥漫性分布或局限性分布。 前者阳性颗粒弥漫而均匀地分布于整个细胞浆。局 限性是指阳性颗粒呈小斑点状或斑块状局限于细胞 浆中的某一部位、核周或细胞浆的一侧。 ? 4. 微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒 毛，而胞浆和胞膜可以是阳性或阴性表达。这种 表现形式最常见于各种腺