课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 2.pptVIP

课 题 2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 引言： 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能 直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素 分解成氨之后才能被植物利用。 思考 1 ：为何细菌能将尿素分解成氨？ 土壤中的细菌能合成催化分解尿素的脲酶 CO(NH 2 ) 2 脲酶 + CO 2 2NH 3 + H 2 O 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线 菌也能分解尿素。 思考 3 ： ①怎样从土壤中分离出能够分解尿素的细菌？ ②怎样统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌？ 思考 2 ：土壤中有哪些细菌能分解尿素？ 人为提供有利于目的菌株生长的条件 ( 包 括营养、温度、 pH 等 ) ，同时抑制或阻止其 他微生物生长。 （一）筛选菌株方法： ——使用以尿素为唯一 N 源的选择培养基 筛选。 一、基础知识： 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO 4` 7H 2 O 2.1g NaH 2 PO 4 1.4g KH 2 PO 4 分离分解尿素细菌的选择培养基配方 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至 1000ml 。 1 、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。 （二）统计菌落数目方法： （ 1 ）不能区分死菌与活菌； （ 2 ）不适于对运动细菌的计数； （ 3 ）个体小的细菌在显微镜下难以统计计数； 缺点： 2. 间接计数法： ——稀释涂布平板统计。 （ 2 ）同一稀释度下，应涂布三个或三个以 上的涂布平板。 （ 1 ）分离不同微生物要有不同的稀释度： 细菌一般为 10 4 ， 10 5 ， 10 6 。 放线菌一般为 10 3 ， 10 4 ， 10 5 。 真菌一般为 10 2 ， 10 3 ， 10 4 。 （ 3 ）培养时 ，还 应设置一个空白平板和三 个涂布平板一起培养。 目的：前者是为了检 测培养基是否被污染或者灭菌是否彻底；后 者是为了增强实验的说服力与准确性。 （ 4 ）统计计数时： 为了保证结果准确，一般 选择菌落数在 30 —— 300 的平板上进行计数， 并要计算出某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数。 每克样品中的菌落数＝ (C ÷ V) × M 其中 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数； V 代表涂布平板时所用的稀释液的 体积 (m Ｌ ) ； M 代表稀释倍数。 （ 5 ）每克样品中的菌落数的计算公式： ——统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 因为当两个或多个活菌重叠生长时，平板 上只观察到一个菌落。 （ 6 ）稀释涂布平板统计法的特点： 二 . 实验操作 1 、土壤取样 选择肥沃、湿润的土壤，先铲去表层土 3cm 左右，再取样，将样品装入事先准备好信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌。 2 、制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁进行 ◆应采用 10 4 ， 10 5 ， 10 6 三种不同的稀释度 3 、样品的稀释 ◆应在火焰旁称取土壤 10g 。 4 、取样涂布