结核病的实验室诊断技术及应用ppt课件[文字可编辑].ppt

DNA 用于临床检验的不足 ? “死菌检测呈阳性” ，与临床相关性差 ? 不能区分“潜伏感染”“活动性感染” ? 易交叉污染 ? 反应易受抑制 31 ? NASBA （国外） ? TMA （国外） ? SAT （国内） 四、常见的 RNA 检测技术 32 SAT 技术是将核酸恒温扩增和实时荧光 检测相结合的一种新型 RNA 检测技术。 TB — SAT 检测技术 33 TB-RNA 释放 恒温扩增 实时检测 超声波（ 300W ） 15 min 痰液预处理 42 ℃ 40 min 与反应液混合 60 ℃ 10 min 42 ℃ 5 min TB-SAT 操作流程 50 μ l 稀释液 全程 2 小时，会做 PCR ，就学的会 SAT 34 TB-SAT 检测技术优点 灵敏 检测下限 1--10 条菌 /ml 快速 42℃恒温扩 增 ,30 分钟内扩增 10 亿倍 简便 无提取步骤， 扩增结束即得出结果。 特异 rRNA 特异性非 常高 污染率低 RNA 易降 解，环境中存在时间短 35 RNA 诊断技术的优势 ? 灵敏度高： RNA ≥ DNA 拷贝数 ? 与临床相关性好 ：区分“死活菌”： 减少抗生素滥用 ? 可以诊断“活动性感染”： 活动性感染： RNA 转录活跃 潜伏感染： RNA 不转录 ? 不易污染 ：靶标和扩增产物都是 RNA 36 TB-SAT 检测区分 MTB 和 NTM 结核分枝杆菌复合群 （ MTB ）： 人型结核分枝杆菌 牛型结核分枝杆菌 非洲型结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 （ NTM ）： 研究表明， TB-SAT 可 以区分如下 NTM ：堪 萨斯分枝杆菌、胞内分 枝杆菌、龟分枝杆菌、 戈登分枝杆菌、海分枝 杆菌等 18 种 Novel Real-Time Simultaneous Amplification and Testing Method To Accurately and Rapidly Detect Mycobacterium tuberculosis Complex J.Clin.Microbiol.2012,50(3):646.DOL:10.1128/JCM.05853-11. 37 活菌检测技术，可用作肺结核治疗效果评估 ? 据文献报道：每个结核分枝杆菌含有约 2000 个拷贝 rRNA ? 研究表明： rRNA 与结核分枝杆菌的生活力有着很好的相 关性， rRNA 可以反映结核分枝杆菌的死菌活菌状态 ? 研究表明：在用药治疗期内，随着结核分枝杆菌的死亡， rRNA 大约在 7 天左右时间全部降解 。而 DNA 含量几乎保持 不变 VIVIAN JONAS,et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Sept.1993, p.2410-2416 CLAUDIO PIERSIMONI, et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,Jan.1997, p.193 – 196. GABRIELLE M. E. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 38 SAT 更有利于治愈判断 窗口期 时间示意 相对浓 度示意 抗体 RNA DNA 病原体感染前后各检测靶标的含量变化 死菌的 RNA 快速降解，有助治愈判断 用 药 治 疗 39 相比 DNA,RNA 检测能更好的体现疗效 服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天 DNA 和 RNA 的滴度变化，相比 DNA,RNA 与药物浓度变化的符合率更高， RNA 检测能更好的进行疗效评估。 GABRIELLE M. E. Assessment of Mycobacterial Viability by RNA Amplification. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 DNA RNA 40 结核病实验室诊断技术及应用 1 全球范围内结核病疫情急剧恶化 ? 全球 1/3 人口（约 20 亿）已感染了结核菌， 人口的大规模流动 ? 结核病与艾