第五章细菌基因重组及遗传分析.pptVIP

（1）不同的非选择标记进入受体且重组的时间不同，但都是稳定的； （2）各基因的重组频率随着时间的增加而增加，直至极值； （3）按时间顺序，先重组和后重组的基因，重组率的极值在逐步减少； 该方法主要根据基因转移的先后次序，以时间为单位，求基因间的遗传距离。 部分二倍体：当F＋或Hfr的细菌染色体进入F－后，在一个短时期内，F－细胞内的某些位点就会成为二倍体DNA。 部分二倍体中发生交换: 单数交换：打开环状染色体，产生一个线性染色体，这 种细胞是不能成活的。 偶数交换：产生可遗传的重组体和片段。 四、中断杂交试验和基因定位 中断杂交：就是将两个菌株（例如Hfr a+ strs×F- a- strr）在培养液中进行通风培养，每隔一定时间取样，把菌液放入组织捣碎器里搅拌以中断杂交，经过稀释接种到鉴别培养基上，待形成菌落后鉴定它们的基因型。 1955年Wollman和Jacob首次进行中断杂交实验： 供体菌：HfrH strs thr+ leu+ azis tons lac+ gal+ 受体菌： F- strr thr? leu- azir tonr lac- gal- 将大约10倍的F-菌与 Hfr对数期菌混合，轻轻振荡培养 在不同时间间隔取样，然后在组织搅拌中剧烈振荡,中断杂交 振荡后的培养物涂布于加了链霉素的基本培养基上 筛选不同于两个亲本的thr+ leu+ strr重组子 再对每一个重组子的非选择性标记azi ton lac gal 进行测定。 azi：叠氮化钠抗性， ton：噬菌体T1抗性 中断杂交实验过程 中断杂交实验结果 利用中断杂交实验作图 大肠杆菌染色体是环形的 不同Hfr菌株进行中断杂交实验，基因转移的顺序、起点和转移方向各不相同。 推断大肠杆菌的染色体为环形，而F因子在细菌染色体上有许多插入位点，且插入方向不同。 Hfr H o thr azi lac tsx gal trp mal xyl metB thi F C o tsx lac azi thr thi metB xyl mal trp gal F J4 o thi metB xyl mal trp gal tsx lac azi thr F P72 o metB thi thr azi lac tsx gal trp mal xyl F Trp mal Gal xyl tsx metB lac thi azi thr C P72 H J4 当转移时间间隔在两分钟之内， 如已知lac与ade紧密连锁，距离约为1分钟，中断杂交作图就不可靠，须用传统的重组作图(recombination mapping)。 紫红色菌落：lac+ade+ 780（亲本型） 白色或粉红色菌落：lac- ade+ 220（重组型） Hfr: lac+ade+strs X F-: lac-ade-strr 混合60min F-：ade+strr 1000 MM+str 影印EMB 五、重组作图 二个基因紧密连锁: lac-：乳糖不发酵 ade-：腺嘌呤缺陷型 1、 重组子的产生 lac- ade+ strr lac+ ade+ strr lac+ ade+ strs lac- ade- strr lac- ade- strs lac+ ade+ strs lac- ade- strr lac+ ade- strs 2、 重组频率的计算 1分钟相当于20%重组值，即：1min=20cM RFlac-ade = *100% lac-ade+ lac+ade++lac-ade+ = *100%=22%=22cM 220 1000 3、大肠杆菌的遗传图谱 图距单位：分钟 总长度：100分钟 起点（0分钟） ：thr座位 大肠杆菌的环形遗传学图 六、BAC人工染色体 为什么会想到把F质粒改造成载体？ 自然发生的F因子能携带1/4的大肠杆菌染色体而不显张力或不稳定。 拷贝数低: 1 有助于