精品第3节 高效液相色谱的类型.pptVIP

课件 课件 课件 课件 第三节 高效液相色谱的类型 优选 * 根据固定相和分离机理不同，高效液相色谱可分为多种类型： 液-液吸附色谱 液-固分配色谱 化学键合相色谱 离子交换色谱 离子色谱 尺寸排阻色谱 …... 优选 * 一、液—固吸附色谱 (一) 原理 基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同的吸附能力而进行分离。 当流动相携带试样组分通过吸附剂时，各组分分子和流动相分子与吸附剂表面活性中心发生竞争吸附，与吸附剂性质类似的组分易被吸附，与吸附剂表面活性中心的几何结构相适应的组分也易被吸附,结果不同组分由于结构的不同，受到的吸附力也不同，则保留值也不同，最终被分离。 优选 * (二)固定相 液—固吸附色谱常用的固定相是： 固体吸附剂， 主要有： 极性：硅胶、氧化铝、分子筛 非极性：活性炭 优选 * (三)用途 主要用于分离极性不同或含极性基团相同但数目不同的试样，也适合分离异构体，但不宜分离同系物。 液—固吸附色谱的分离效果不太好，目前使用较少。 优选 * 二、液—液分配色谱 (一)原理 根据各待测组分在互不相溶的两相中分配系数不同而进行分离的。 在色谱柱中，随着流动相的移动，被分离各组分在固定相和流动相之间的分配平衡需进行多次，造成各组分的迁移速率不同，从而实现分离的过程。 优选 * (二) 固定相 原则上，用于GC的固定相也可用于HPLC作固定相，常用硅胶做载体。但HPLC固定液易流失，因此常用的只有几种，按极性由高到低为：?,?’-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEM)、三甲撑二醇(TMG)、十八烷(C18)、角鲨烷(SQ)等。 优选 * (三) 流动相 HPLC分析中，为防止固定相的流失，流动相与固定液应尽量不互溶，或者说二者的极性相差越大越好。因此，根据流动相与固定相极性的差别程度，可将液液色谱分为： 优选 * 1. 正相分配色谱 定义：固定相为极性，流动相为非极性的液—液分配色谱称正相分配色谱。 用途：主要用于极性组分的分离。 流出顺序：被分离组分按极性从小到大的顺序流出，即极性小的先流出，极性大的后流出。 优选 * 2. 反相分配色谱 定义：固定相为非极性，流动相为极性的液—液分配色谱称反相分配色谱。 用途：主要用于非极性组分的分离。 流出顺序：被分离组分按极性从大到小的顺序流出，即极性大的先流出，极性小的后流出。 优选 * 三、化学键合相色谱 (一) 化学键合固定相 是通过化学反应以共价键形式将有机固定液键合在硅胶载体表面，而得到的各种性能的固定相。 优选 * (二)优点 (1) 固定液不流失。 (2) 热稳定性和化学稳定性好， 能在pH=2?8.5的介质中使用。 (3) 消除了机械涂渍固定液表面不均匀 带来的弊病。 (4) 可键合各种不同类型的固定液， 制备适应于各种色谱的固定相。 (5) 适合于梯度淋洗。 优选 * (三)化学键合方法 通常，化学键合相的载体主要是硅胶(表面有硅醇基)： 方法一 (硅酯化)： 方法二 (氯化)： 方法三 (硅烷化)： 优选 * 特点： (1) Si-O-R：对热不稳定、遇水、乙醇等极性溶剂会发生水解，使酯链断裂，因此只适合于不含水或醇的流动相体系。 (2) Si-R(或Si-N)：抗水解能力强，热稳定性比硅酸酯好。但所用的格氏反应不方便。 (3) Si-O-Si-R：不水解，热稳定性好，在pH=2-8范围内对水稳定。 注意事项：化学键合固定相不适于酸、碱度过大或含有氧化剂的缓冲溶液作流动相。 优选 * (四)原理 这种固定相分离机理既不是简单的吸附，也不是单一的液-液分配，而是二者兼而有之。化学键合表面的覆盖度决定哪种机理起主要作用。对多数键合相来说，以分配机理为主。 优选 * (五) 分类 1. 正相键合相色谱 正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比k减小。 正相键合相色谱 固定相极性大 硅胶-OH(或双-OH)，硅胶-CN 流动相极性小 烃类(己烷、庚烷、异辛烷等)+适量极性溶剂 (CHCl3, CH3OH, CH3CN) 分析对象 多用于极性或中等极性化合物的分离，以及极性不同化合物的分离。 流出顺序 极性小的先流出，极性大的后流出 优选 * 2. 反相键合相色谱 反相键合相色谱 固定相极性小 硅胶-C18，硅胶-苯基 流动相极性大 甲醇-水，乙腈-水，水和无机盐的缓冲溶液 分析对象 多用于多环芳烃等低极性化合物的分离；改变流动相配比也可用于分离极性化