2019年毛细管电泳技术及应用.pptVIP

1. 高压电源 （ 1 ） 0 ～ 30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （ 2 ）具有恒压、恒流、恒功率输出； （ 3 ）电场强度程序控制系统； （ 4 ）电压稳定性： 0.1% ； （ 5 ）电源极性易转换； 2. 毛细管柱 （ 1 ）材料：石英：各项 性能好；玻璃：光学、机 械性能差； （ 2 ）规格：内径 20 ～ 75 μ m ，外径 350 ～ 400 μ m ； 长度 =1m 3. 缓冲液池 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限 /mol 特点 紫外 - 可见 10 -13 ～ 10 -15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10 -15 ～ 10 -17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10 -18 ～ 10 -20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10 -18 ～ 10 -19 离子灵敏，需专用的装置； CE 具体操作步骤： 毛细管电泳的基本步骤包括清洗毛细管、更换电泳 缓冲液、进样、电泳并同时在线检测。 1). 清洗毛细管 对于一根新的或久未使用的毛细管，需用 1mol/L 的 NaOH 溶液、 0.1mol/L NaOH 溶液、超纯水依次清洗。 在有些情况下还需用 0.1mol/LHCl 、甲醇或去垢剂清 洗 , 强碱溶液可以清除吸附在毛细管内壁的油脂、蛋 白质等，强酸溶液可以清除一些金属或金属离子， 甲醇、去垢剂可去除疏水性强的杂质 。 在进行每次分析前可用相当于毛 细管总体积 2~3 倍的 0.1mol/L 的 NaOH 溶液清洗一遍，一般为 2~3 min ，而后 注入电泳缓冲液，以保证分析结果的 重复性。 2). 更替电泳缓冲液 在进行 每次分 析 前可用 相 当于毛 细 管总体 积 2~3 倍的 0.1mol/L 的 NaOH 溶液清洗一遍，一般为 2~3 min ，而后 注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。 上一步清洗过程结束后，毛细管和电极从清洗液中移至 电泳缓冲液，不可避免地将强碱或强酸等溶液带至其中。 缓冲液本身也会因挥发、电泳等而改变其离子强度。因 此对于精确分析，每分析五次后需更换一次样品盘中的 缓冲液。一般分析，半天更换一次即可。 3 ）毛细管电泳的进样方式 进样量：毛细管长度的 1%-2% ； nL 级、非常小； 1. 流体力学进样方式 （ 1 ）进样端加压 （ 2 ）出口端抽真空 （ 3 ）虹吸进样 t L Pd ? 128 π 4 ? ? 进样体积 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 2. 电动进样方式 t L ct r V ef eo 2 π ) ? ? ? ? （ 进样量 进样不均 ：电歧视现象，淌度大的离子比淌度小的进样 量大； 离子丢失 ：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不 去； 特别适合黏度大的试样 ； 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 ? Buffer: 50 mM phosphate – TEA (pH 2.5) with 4.0% HP- β -CD (w/v) and 50% methanol; Applied potential: 30 kV; Sample: 1 mg/L propranolol dissolved in (A) (B) water, (C) methanol; ? (A) Pressure injection 0.5 psi., 5 s, ? (B) (C) electrokinetic injection 10 kV, 5 s. -0.0005 -0.0004 -0.0003 -0.0002 -0.0001 0 0.0001 0.0002 14 16 18 20 22 24 Time (min) A b s o r b a n c e -0.0053 -0.0051 -0.0049 -0.0047 -0.0045 -0.0043 -0.0041 -0.0039 -0.0037 -0.0035 14 16 18 20 22 24 Time (min) A b s o r b a n