2019年高速逆流色谱.pptVIP

高速逆流色谱 一、概述 高速逆流色谱（ High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC ）是一种连续高效的 液 - 液分配色谱分离技术 。该技术不需要 固体支撑 体 ，主要依据物质在 两相中分配系数的不同对物 质进行分离 ，相对其他常用色谱（如柱色谱、高 效液相色谱等）来说，具有 无不可逆吸附 和 回收 率高 的特点，特别适合于 天然活性成分 的分离。 HSCCC 技术最早是由美国国立卫生院 Ito 博士 研 制应用，我国对 HSCCC 技术应用较早， HSCCC 技 术发展十分迅速，在过去 20~30 年中，出现了 一系列新型的分离技术，积累了大量的科研成 果，自 1995 年以来，国外已有 5 本 英文专著出 版，我国目前也有 两本 中文专著出版。 二、 HSCCC 色谱工作原理 HSCCC 色谱包括 储液罐 、 泵 、 螺旋管分离 柱 、 检测器 、 色谱工作站 或 数据采集软件 或记 录仪以及 馏分收集器 等部分。 选择溶剂体系 平衡 选择固定相 充满螺旋管柱 高速旋转螺旋管 泵入 流动相 流动相流出，注入待分离的样品 收集馏分 分 离 效 果 溶剂系统 固定相 流动相 洗脱方式、流动相的流速 仪器的旋转方向和转速 样品浓度和进样方式 柱温等 检测器 紫外 - 可见光检测器 蒸发光散射检测器 质谱检测器等 /v/b1585286663.html /v/b1585286663.html 与其它色谱分离技术相比，高速逆流色谱具有 如下特点： 分离效率高 制备量大 操作灵活 回收率高 应用范围广 分离成本低 三、溶剂体系的要求 1 溶剂体系的种类 弱极性溶剂体系 中等极性溶剂体系 强极性溶剂体系 两相 由 正己烷和水 组成，可用 甲醇、乙醇、醋酸 乙酯 等来调节溶剂系统的极性。 典型的溶剂体系 有： 正己烷 - 醋酸乙酯 - 乙醇 - 水 正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水 中等极性溶剂体系的 两相 由 氯仿和水 组成，可以加入 甲醇、乙醇、醋酸乙酯 等来调节溶剂系统的极性。 适合于 黄酮类、蒽醌类、香豆素 和一些极性较大的 木 脂素和萜类 的分离。 典型的溶剂体系是 氯仿 - 甲醇 - 水 （ 4 ： 3 ： 2 ） 强极性溶剂体系的 两相 基本物质是 正丁醇和水 ，可以 加入 甲醇、乙醇、醋酸乙酯 等溶剂来调节溶剂系统的 极性，也可以在氯仿水体系中调节 pH 值 来增大极性 , 或 在异丁基甲醚水体系中加入 适量的酸和碱 . 适合于极性 很强的生物碱类化合物的分离。 典型的溶剂体系 : 氯仿 - 甲醇 -HCl 异丁基甲醚 - 水 （有机相加三乙胺，水相加盐酸） 2 溶剂体系选择的步骤 （ 1 ）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系 ； （ 2 ）取少量样品于上下相 各 2 毫升 的溶剂体系中，用 TLC 进行检验，可加入 甲醇、乙醇、醋酸乙酯 等来调节 溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比 K 为 0.5~2 为止； （ 3 ）用 HPLC 测定 K 值； （ 4 ）用 分析型 HSCCC 进行预分离，再用 制备型高速逆 流色谱 进行分离。 （ 1 ） 溶剂不造成样品的分解或变性 ； （ 2 ） 样品在溶剂中有足够高的溶解度 ； （ 3 ） 样品在溶剂系统中有合适的分配系数 值 ； （固定相为管柱总体积的 50% 以上，分配系 数为 0.5~2 ） （ 4 ） 固定相能实现足够高的保留 。 3 选择溶剂时应注意 生物碱 氯仿 - 甲醇 -NaH 2 PO 4 溶液 (pH = 4) 溶剂体系 氯仿 - 甲醇 - 盐酸体系 异丁基甲醚 - 四氢呋喃 - 水体系 异丁基甲醚 - 水体系 正己烷 - 乙醇 - 水体系 正己烷 - 醋酸乙酯 - 水 正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水 4 不同物质的溶剂体系 黄 酮 类 化 合 物 正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水 正丁醇 - 醋酸乙酯 - 水 氯仿 - 甲醇 - 水 正己烷 - 醋酸乙酯 - 正丁醇 - 甲醇 - 醋酸 - 水 正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水 萜类 异辛烷 -