8.4体内样品预处理-2.pdf

体内样品预处理 --固相萃取，其他方法 体内样品预处理方法 • 蛋白沉淀 • 液-液萃取 • 固相萃取 • 超滤法 • 缀合物水解 • 化学衍生化 固相萃取法 （solid-phase Extraction ，简称SPE ） 优点： 大大缩短样品的处理时间； 可避免乳化现象； 便于自动化操作； 缺点： 成本高于液相萃取法； 固相萃取法的原理  含药物体内样品通过小柱时, 药物及内源性物质因为理化性 质的差异，与固定相之间的亲和力不同而实现分离；  洗脱方式：①冲洗溶剂洗去干扰物, 用对药物亲和力更强的 溶剂洗脱药物; ②药物直接被洗脱, 干扰物保留在萃取柱上 ① ② 固相萃取法的装置 固相萃取小柱 固相萃取仪 固相萃取柱类型 SPE的填料种类：  亲脂型：用的最多，其中十八烷基硅烷键合硅胶 （简称C ）最常用，适用于疏水性药物 18  亲水型：离子交换型，适用于高极性、可电离的 药物 固相萃取法的步骤 (2) 固相萃取法操作步骤 1. 活化: 甲醇润湿小柱, 活化填料; 净化填料； 2.平衡: 水/缓冲液冲洗小柱, 去除过多的甲醇。但若甲醇含量过 低(低于5%)，会导致C18链弯曲折叠，萃取回收率降低； 3.装样: 加样, 使样品通过小柱, 并弃去滤过废液； 4.淋洗: 水/缓冲液冲洗小柱, 去除内源性及其它干扰物质； 5.洗脱: 洗脱溶剂洗脱待测物, 收集洗脱液，挥干溶剂备用或直 接进行在线分析； , 平衡 超滤法的原理 3. 超滤法（ultrafiltration）  简便快捷，结果稳定、可靠  是游离药物分析的首选方法  尤其适合治疗药物监测（TDM）的血样分析 (4) 提取操作 超滤法的原理  是一种膜分离技术；  按照截留分子量的大小，选择半透膜,可分离30 ~1000kD的可溶性生物大分子；  可将血浆或血清中游离型药物与大分子血浆蛋白、 及结合了药物的血浆蛋白分离； 缀合物水解 (三) 缀合物水解法 药物或其代谢物与体内的内源性物质结合生成的产物称为缀 合物（conjugate）  为了测定尿药总量，需水解缀合物  目前逐渐趋向于直接测定缀合物的含量 缀合物水解方法 • 强酸，加热  葡萄糖醛酸苷酶 溶剂萃取过 • 简便, 快速 或/和硫酸酯酶 程中缀合物( • 有些药物在  条件温和 尤其硫酸酯) 水解过程中  专属性强 直接分解 会发生分解  水解时间较长 • 专一性较差  可能引入黏蛋白 1. 酸水解法 2. 酶水解法 3.溶剂解法 化学衍生化法 (四) 化学衍生化法 1、使药物变成能被分析的性质 目的 2、提高检测灵敏度 3、增强药物稳定性 4、提高对光学异构体分离的能力 1. 在GC中的应用 2. 在HPLC中的应用 (1) 硅烷化: 三甲基氯硅烷 衍生化的分类 (TMCS) 柱前/柱后;在线/离线