片段分析图形分析.pptx

片段分析热烈欢迎莅临参观指导内容提要 检测原理 适用范围 峰图举例 疾病举例原理(1) Std-PCR的原理由正反向引物扩增包含了重复序列的目的片段，检测目的片段的长度，从而计算出重复区的重复次数。 原理（2)TP-PCR原理PCR的反向引物被设计与致病基因的重复序列进行杂交。各种大小不一的序列在三重PCR反应中被扩增出来。如果重复数量增加了，一个明显的PCR产物轮廓（梯形轮廓）会在峰图中出现。两种方法的优缺点结果出现纯合子时，要用TP-PCR技术进行补充，以防漏检。优点缺点STD-PCR结果精确方法学局限，重复片段太大时，扩增产物产量过少，容易漏检TP-PCR无论重复数目长度有多少，都会有一定量的产物产生重复数目的定量不准适用范围主要用于：动态突变---Dynamic mutation致病基因的简单重复序列拷贝数不稳定地异常扩展，导致相关基因的功能异常。多为三碱基重复，少数四、甚至五、六碱基重复(CAG)n; (ATTCT)n; (GGCCTG)n正常人n值较低，超过一定范围就致病(full mutation)。Normal、full mutation之间存在“Grey zone”。遗传稳定性：n值越高，越不稳定：Normal Grey zone full mutation间隔序列可以增加遗传稳定性峰图主峰+AStutter -1+AStutter -2Stutter -3