第13 核酸扩增仪课件.pptVIP

实时荧光定量 PCR 核酸扩增仪 ? 金属板式实时荧光定量 PCR 仪 ? 离心式实时定量 PCR 仪 ? 各孔独立控温的荧光定量 PCR 仪 各孔独立控温的荧光定量 PCR 仪 ? 各孔独立控温的定量 PCR 仪设计非常独到，不同 样品槽分别拥有 独立的智能升降温模块 ，各孔独 立控温，可以在同一台定量 PCR 仪上分进行不同 条件的定量 PCR 反应，随时利用空置的样品槽开 始其他定量反应，使用效率非常高。 ? 升降温速度高达 10 ℃／ s ，控温精度高。每个模块 独立控制的激发光源和检测器直接与反应管壁接 触，保证荧光激发和检测不受外界干扰。 各孔独立控温的荧光定量 PCR 仪 ? 该类仪器整合多通道光学检测系统，能有效分辨 多种荧光染料，可对同一样品进行 多靶点分析 ， 同时检测四种荧光信号。 ? 可使用 Taq man 探针、分子信标、 Amplifluor 引物 等多种检测方法，定量线性范围可达 9 个数量级。 其软件允许一台仪器同时操作多个样品模块，既 满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现任 意梯度反应。 ? 缺点：上样不如传统方法方便，而且需要独特的 扁平反应管，使用成本较高。适合多指标快速检 测，但目前在国内应用尚少。 第三节 PCR 核酸扩增仪的性能指标、操作规程 及常见故障的排除 ? PCR 核酸扩增仪的性能指标 ? PCR 核酸扩增仪的操作规程 ? PCR 核酸扩增仪常见故障的排除 第十三章 PCR 核酸扩增仪 (PCR nucleic acid Amplifier) 教学基本要求 ? 掌握 核酸扩增仪的工作原理和主要性能指标。 ? 掌握 梯度 PCR 仪和原位 PCR 仪的功能和特点。 ? 掌握 实时荧光定量 PCR 扩增仪的种类及特点。 ? 熟悉 PCR 技术的原理； PCR 扩增仪的种类；荧光 实时定量 PCR （ RQ-PCR ）技术原理。 ? 了解 PCR 扩增仪的操作规程； PCR 扩增仪常见故 障的排除； PCR 扩增仪的应用。 内 容 提 要 第一节 PCR 核酸扩增仪的工作原理 第二节 PCR 核酸扩增仪的分类与结构 第三节 PCR 核酸扩增仪的性能指标、操作规 程及常见故障的排除 第四节 PCR 核酸扩增仪的临床应用 第一节 PCR 核酸扩增仪的工作原理 ? PCR 技术的发展简史 ? PCR 技术的原理 ? 核酸扩增仪的工作原理 PCR 技术的发展简史 ? 1971 年， Kjell Kleppe 等描述的一项基于酶的 体外 DNA 复制实验 。 ? 1985 年美国 PE 公司 Kary Mullis 在开车前去北 加利福尼亚红树县的一条被月光笼罩的山路上 构思了 PCR 。 ? 1993 年， Mullis 因此项技术获 诺贝尔化学奖 。 PCR 技术的原理 ? PCR 技术的本质是 核酸体外扩增 ? 加热使双链 DNA 解开螺旋，在退火温度条件下 引物同模板 DNA 杂交，在 Taq DNA 聚合酶， dNTPs ， Mg 2+ 和合适 pH 缓冲液存在条件下延 伸引物，重复 “变性 → 退火 → 引物延伸” 过程 至 25 ～ 40 个循环，呈指数级扩大待测样本中的 核酸拷贝数。 PCR 技术的原理 PCR 循环 – 第一步 – 加热 变性 PCR 技术的原理 PCR 循环 - 第二步 – 引物与模板 DNA 分子 退火 PCR 技术的原理 PCR 循环 - 第三步 - 引物 延伸 PCR 技术的原理 第 1 个 PCR 循环完成后 —— 得到两个拷贝的靶序列 PCR 技术的原理 30 次循环后靶序列扩增的数量 循环数 扩增产物量 （ 2 n ） 1 2 1 ＝ 2 2 2 2 ＝ 4 3 2 3 ＝ 8 4 2 4 ＝ 16 5 2 5 ＝ 32 6 2 6 ＝ 64 20 2 20 ＝ 1,048,576 30 2 30 ＝ 1,073,741,824 PCR 核酸扩增仪的工作原理 ? PCR 核酸扩增仪的工作关键是： 温 度 控 制 PCR 核酸扩增仪的工作原理 控温方式 水浴锅控温 压缩机控温 半导体控温 离心式空气 加热控温 第二节 PCR 核酸扩增仪的分类与结构 ? 普通定性 PCR 核酸扩增仪 ? 实时荧光定量 PCR 核酸扩增仪 普通定性 PCR 核酸扩增仪 ? 按照变温方式分为以下三类： ? 水浴式 PCR 仪 ? 变温金属块式 PCR 仪 ? 变温气流式 PCR 仪 普通定性 PCR 核酸扩增仪 —— 水浴式 PCR 仪 ? 一般由 三个不同温度的水浴槽 和 机械臂 组成。 ? 采用半导体传感技术、电子技术和计算机技术进 行水浴温度的测量、显示和控制 ? 并经计算机控制由机械臂完成样品在每个水浴槽 的置放以及槽间的移动。 ? 特点：仪器体