从细胞因子与能量代谢角度研究慢性心力衰竭治疗新靶点与干预策略.pptVIP

短肽库 TNR1活性测试（试剂盒） 有机合成 靶标 （ TNFR1 ） 专利多肽Pep3 构效关系分析 优选多肽Pepx 合理化设计 结构优化 细胞活性测试 （IC50） 小分子抑制剂 合理化设计 1. 多肽设计、合成及优化 TNF Receptor 1、TNF?和小分子抑制剂的模建作用模式 基于晶体结构：1FT4 和 1TNR * TNF?小分子抑制剂的发现（设计、合成和活性测试） 活性测试 分子动力学模拟 分子对接 小分子数据库 大于40万化合物 苗头化合物 目标化合物 结构改造 有机合成 活性测试 先导化合物 * (A) Chemical structure of the small molecule TNF-α inhibitor. See (12) for synthetic route used. (B) Compound inhibition of TNF-α binding to TNFR1 in vitro. An ELISA (12) was used to measure inhibition of solution-phase TNF-R1 horseradish peroxidase conjugate binding to biotinylated TNF-α immobilized on a strepavidin-coated microtiter plate by serial dilutions of compound. The solid line represents a four-parameter curve fit (20) that yielded an IC50 value of 22 μM. (C) Compound inhibition of TNF-α induced IκB-α depletion in HeLa cells. Cells were treated with sufficient TNF-α or IL-1β to give an 80% of maximal IκB-α depletion response after a 30-min exposure (0.4 and 0.04 ng/ml, respectively), as measured in an assay of cell lysates (12). Solid circles show that compound addition inhibits this TNF-α–induced IκB-α depletion and yields an IC50 value of 4.6 μM. Open circles show that compound addition does not affect orthogonal IL-1β–induced IκB-α depletion. Error bars indicate standard deviations for triplicate measurements. 二甲基胺为隔离基相联结的三氟甲基苯基吲哚和二甲基色酮能够抑制TNF-α和它的受体之间的链接。抑制TNF-α与TNFR1结合 IC50为22μmol/L，而抑制TNF-α 诱导的 IκB-α解离IC50 为4.6μmol/L。 2. 正在进行TNF?小分子抑制剂的研发工作 通过与本院“结构生物学与药物设计实验室”罗海彬教授课题组合作，以靶蛋白及其受体的复合晶体结构为模板，进行“TNF Receptor 1、TNF?和小分子抑制剂的模建作用模式及TNF?小分子抑制剂的设计、合成和活性测试”。 双方已有良好合作基础，共同发表文章如下，为靶向TNF?及其受体的小分子抑制剂研发奠定了良好基础。 Liu M, He L, Hu X, Liu P, Luo HB. 3D-QSAR, homology modeling, and molecular docking studies on spiropiperidines analogues as agonists of nociceptin/orphanin FQ receptor. Bioorg Med Chem Lett. 2010; 20(23): 7004-7010 Chen SK, Zhao P, Shao YX, Li Z, Zhang C, Liu P, Luo HB, Hu X. Moracin M from Morus alba L. is a natural phosphodiesterase-4 inhibitor. Bioorg Med Chem Lett. 2012;22(9):3261-3264.