蛋白印迹手册(最后完整稿).doc

蛋白转印和检测指导 第三版 简 介 蛋白质印迹使用手册展示了蛋白质样品转印和检测过程中化学方法的基本理论,为蛋白 印迹技术的实际操作提供了具体的指导;对使用的仪器以及试剂进行了说明;同时为实验过 程中产生的故障进行技术支持。 针对不同的研究课题、 实验设计方案和蛋白样品, 将选择不同的仪器、 抗体和检测方法。 Bio-Rad 供的这本使用手册可以拓宽您对印迹技术的了解,同时为如何优化实验结果提供技 术支持。 主导地位与品质 Bio-Rad 公司在 Western 印迹技术以及产品设计、制造方面已经有了近 30年的经验。 Bio-Rad 的印迹产品质量高、耐用,同时又提供了专业的技术支持,保证了复杂样品的研究 和分析。 满足您的转印需要 Bio-Rad 提供以下产品: ? 不同尺寸的凝胶印迹仪器 ? 微量过滤设备 ? 多通道筛选仪 ? 印迹膜 ? 蛋白标准品 ? 转印缓冲液和背景去除试剂盒 ? 比色检测和化学发光检测试剂 ? 全蛋白染色试剂 ? 二级抗体和抗体耦联体 登陆 网站可获得相关产品的详细使用手册。 Protein BlottingGuide 1 蛋白印迹导论 6第一章 转印技术 转印方法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7电泳转印技术 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8电泳转印原理 电泳转印方法 微量过滤转印系统(斑点印迹系统 . . . . . . . . . . . . . .9印迹系统和电源 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10 转印设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10槽转印设备 半干转印设备 微量过滤系统 电泳转印使用的电源设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 第二章 膜、缓冲液和电源条件 印迹膜的选择 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14硝酸纤维素膜和载体硝酸纤维素膜 . . . . . . . . . . . . . .14聚偏二氟乙烯膜(PVDF . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15 印迹滤纸 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15膜/滤纸三明治结构 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16转印缓冲液选择 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16 常规推荐 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17关于 SDS 和酒精注意事项 Towbin, Bjerrum以及 Schafer-Nielsen 缓冲 液(Tris/甘氨酸缓冲液 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17 CAPS 缓冲液 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18不连续 Tris-CAPS 缓冲液(半干转印 . . . . . . . . . . .18 Dunn 碳酸盐缓冲液 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18其他缓冲液条件的选择 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18 电泳转印过程中的电源条件 . . . . . . . . . . . . . . . . .18电学公式 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19焦耳热 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19影响转印的其他因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19电源设置与转印时间的关系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19高