基于miRNA标记外周血与月经血鉴别方法的研究.pdfVIP

目 录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表VI 前 言1 外周血与月经血判别分析模型的构建3 1 材 料4 1.1 样本4 1.2 主要仪器4 1.3 主要试剂5 2 方 法5 2.1 候选miRNA 分子标记的选择5 2.2RNA 的提取和定量6 2.3cDNA 的合成6 2.4 qPCR7 2.5 统计分析8 3 结 果9 3.1 内参基因的筛选与评估9 3.2 逐步法外周血与月经血判别分析模型 11 3.2.1 四种miRNA 在五种体液中的表达情况分析11 3.2.2 逐步法判别分析模型的建立13 3.2.3 逐步法判别分析函数模型准确性的验证14 3.3 非逐步法外周血与月经血判别分析模型15 3.3.1 六种miRNA 在五种体液中的表达情况分析15 3.3.2 非逐步法判别分析模型的建立17 3.3.3 非逐步法判别分析函数模型准确性的验证18 3.4 两种外周血与月经血判别分析模型的比较20 4 讨 论21 5 结 论24 参考文献25 综述29 参考文献34 附录39 致谢51 个人简历52 山西医科大学硕士学位论文 基于miRNA 标记外周血与月经血鉴别方法的研究 摘 要 目的： 血液作为法医学最常见的体液检材，其准确定性意义重大，而对确定为血液的 样本进一步鉴别其是外周血还是月经血，更是可为案件定性提供重要的指向性线 索。本研究根据两种血液类体液 （外周血和月经血）和三种非血液类体液 （唾液、 精液、阴道分泌液）中多种miRNA 差异表达的特征，构建可区分血液与非血液类 样本和区分外周血与月经血法样本的数学模型，以实现外周血与月经血的准确鉴 别，同时为解决法医学体液鉴别难题提供高度可行的参考方案。 方法： 1. 本研究从文献中挑选出在血液与非血液类样本中差异表达的miR-451a及在 外周血与月经血中差异表达的三种miRNA （miR-205-5p,miR-214-3p,miR-203-3p）， 收集200份五种法医学常见体液样本（外周血、月经血、唾液、精液、阴道分泌液）， 分为训练集和验证集样本，采用SYBR Green 荧光实时定量PCR 技术检测包括内参 基因RNU6b 在内的五种标记，采用SPSS22.0 软件对训练集样本的检测结果进行差 异性分析并建立包括两个判别函数在内的Fisher 判别分析模型，第一个判别函数以 “血液类样本”和 “非血液类样本”为因变量，miR-451a 的检测结果ΔCt 值为自变 量，第二个判别函数以“外周血”与“月经血”为因变量，三种miRNA （miR-205-5p, miR-214-3p,miR-203-3p）的检测结果ΔCt 值为自变量，逐步实现血液与非血液类样 本的鉴别和外周血与月经血法样本的鉴别，验证集样本被用于检验该模型的准确 度。 2. 在前期研究基础上，我们继续收集法医学五种体液样本250 份，增添两种 miRNA （miR-144-3p,miR-144-5p），以“外周血”、“月经血”、“非血液类体液 （唾液、精液、阴道分泌液）”三种体液为因变量，训练集样本的六种miRNA 的 I 山西医科大学硕士学位论文 检测结果ΔCt 值为自变量，构建可同时实现血液与非血液类样本的鉴别和外周血与 月经血样本的鉴别的Fisher 判别分析模型，验证集样本被用于检验该模型的准确度。 3. 为了比较两种外周血与月经血判别分析模型，并验证本研究基于单一体液来 源的样本构建的判别分析模型是否适用于混合样本的鉴别，我们随机选取8份外周 血样本及8份月经血样本，同时制备外周血与月经血混合样本，检测六种miRNA （miR-451a,miR-144-3p,miR-144-5p,miR-205-5p,miR-214-3p,miR-203-3p）的表达 量，将结果ΔCt 值代入两种判别分析模型中比较两种判别分析模型鉴别外周血与月 经血单一