TREM-1通过介导p38MAPK_MMP-9信号通路来调控蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的形成.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表VIII 前 言1 1 材料与方法4 1.1 实验动物4 1.2 主要实验试剂4 1.3 主要实验仪器5 1.4 实验内容5 1.4.1实验设计5 1.4.2 SAH 模型制备6 1.4.3 心脏灌注固定6 1.4.4 药物干预7 1.4.5 SAH 等级评分7 1.4.6 神经功能学评分7 1.4.7 血脑屏障破坏7 1.4.8 脑含水量8 1.4.9 蛋白免疫印迹分析8 1.5 统计学分析8 2 结 果10 2.1大鼠死亡率10 2.2 SAH 出血等级评分10 2.3神经功能评分11 2.4 血脑屏障破坏12 2.5 脑含水量12 2.6TREM-1、p38MAPK/MMP-9及ZO-1 的表达13 2.7ERK1/2 的表达13 3 讨 论16 4 结 论19 参考文献20 综 述25 硕士研究生期间发表论文32 致 谢33 个人简历34 山西医科大学硕士学位论文 TREM-1通过介导p38MAPK/MMP-9信号通路来调控蛛网膜 下腔出血后早期脑损伤的形成 摘 要 目的： 蛛网膜下腔出血(SAH)是一种神经系统急危重症，具有高死亡率、高致残率的特 点。SAH 是指各种原因引起的血管破裂，血液流入蛛网膜下腔而引起的一种临床疾 病，其中自主动脉瘤破裂是最常见的发病原因。之前人们普遍认为SAH 后引起的脑 血管痉挛 (CVS)是导致患者致死、致残率高的原因，但是随着研究的深入，越来越多 的证据指向早期脑损伤(EBI)，认为导致SAH 患者预后不佳的主要原因是EBI。EBI 是指SAH 后72h 内大脑所发生的一系列病理生理改变，包括颅压升高、血脑屏障破 坏(BBB)、脑水肿、微循环障碍及脑细胞凋亡等，其中炎症级联反应起关键作用。据 报道，髓细胞触发受体-1(TREM-1)是一种主要表达于中性粒细胞表面，能导致炎症反 应发生和放大的关键介质，可能参与EBI 的形成，我们前期研究发现，SAH 患者在 发病早期其脑脊液(CFS)中可溶性TREM-1(sTREM-1)的水平明显升高，且与患者病情 严重程度及预后密切相关。同时发现患者起病早期脑脊液中sTREM-1水平与肿瘤坏 死因子(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平呈正相关，提示TREM-1可能与SAH 后早 期炎症级联反应的形成有关，但是具体机制尚不清楚。因此，本研究旨在研究采用 TREM-1特异性抑制剂LP17 对SAH 大鼠实施干预后，观察大鼠脑组织中TREM-1 的表达、脑组织炎症反应及EBI 程度；以及TREM-1表达抑制后其下游P38丝裂原 活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)及基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)和紧密连接蛋白-1(ZO-1)的表达情况；探索TREM-1在SAH 后EBI 形成中 的作用，为临床防治EBI 的形成提供药物作用新靶点。 方法： 本实验中SAH 模型的制备采用颈内血管穿刺法，选用由山西医科大学动物实验 中心提供的SD 成年雄性大鼠，体重250-300g，将72 只大鼠随机分成4 组：假手术 I 山西医科大学硕士学位论文 组、SAH+生理盐水组(生理盐水干预组)、SAH+LP17 1.0mg/kg(低剂量干预组)以及 SAH+LP17 3.5mg/kg(高剂量干预组)，在造模后24h 取大鼠脑组织，用于分析脑水肿 程度和BBB破坏程度，并用蛋白免疫印迹法分析TREM-1、ERK1/2、p38MAPK/MMP-9 以及ZO-1的水平变化。 采用上述相同方法，将48 只S