DNA甲基化应用于药物过敏性猝死法医学诊断的探索研究.pdf

目 录 摘 要I Abstract III 常用缩写词中英文对照表 V 前 言 1 1 材料与方法 3 1.1 样本采集 3 1.2 样本处理及Illumina Methylation EPIC 芯片检测 3 1.3 芯片数据分析 4 1.4 仪器材料 5 2 结 果 6 2.1 样本统计及分组 6 2.2 质量控制 7 2.3 DNA 甲基化差异分析 9 2.4 基因关联网络相关分析 13 2.5 关联分析 19 3 讨 论 23 3.1 药物过敏性猝死与DNA 甲基化相关 23 3.2 药物过敏性猝死与CCL5 基因、HLA 相关基因甲基化相关 23 3.3 “趋化因子→PI3K-Art 途径→蛋白激酶”相关基因的甲基化在药物过敏性猝死 中发挥关键作用 25 3.4 药物过敏相关的CpG 位点（CpG 岛区）的甲基化（去甲基化）可应用于药物 过敏性猝死的法医学诊断 25 4 结 论 27 参考文献 28 综述 31 致 谢 39 个人简介 40 山西医科大学硕士学位论文 DNA 甲基化应用于药物过敏相关法医学诊断的探索研究 摘 要 目的： 药物过敏性猝死的法医学诊断是法医病理学界的一大难题，寻找精准、客观的实 验室诊断指标是法医病理学者目前亟待解决的问题。通过研究分析药物过敏死者与免 疫正常人之间的DNA 甲基化差异，寻找药物过敏相关DNA 甲基化差异位点、为药 物过敏性猝死的法医学鉴定提供精准、客观的实验室诊断指标。 方法： 1. 免疫正常人（6 例）和药物过敏性猝死者（18 例），使用Illumina Methylation EPIC 芯片检测全血DNA 甲基化。2. 芯片数据分析：R 语言 ChAMP 包进行甲基化 DMP 、DMR 差异分析、基因注释和基因关联分析；R 语言R-topGO 、R-KOBAS 软件 包进行GO 及KEGG 功能富集分析。3. 基于基因组关联分析、GO 及KEGG 功能富 集分析的基础上，进一步进行药物过敏相关DNA 甲基化位点（区域）功能的研究。 4. 基于DMP 、DMR 差异分析和基因关联分析，进行选药物过敏性猝死DNA 甲基化 诊断指标的筛选。 结果： 1. HLA-DMA 、HLA-DMB 、HLA-DOB 、HLA-DPA1 、HLA-DPB1 基因的甲基化 水平与药物过敏猝死显著关联；2. 头孢菌素类药物所致过敏性猝死与趋化因子 CCL5 基因启动子区域的DNA 低甲基化、HLA-DOB 基因甲基化有关；3.药物过敏死者在 “趋化因子→PI3K-Art 通路→蛋白激酶”途径上基因甲基化水平差异富集；4. 筛选得 到一批在正常人中甲基化水平稳定，药物过敏性猝死者具有显著差异的 CpG 位点及 CpG 岛。 I 山西医科大学硕士学位论文 结论： 药物过敏与DNA 甲基化有关，不同类别药物所致过敏可能导致不同区域甲基化 差异；法医学上，应用DNA 甲基化差异基因进行药物过敏性猝死的法医学诊断可行； 临床上，从DNA 甲基化水平进行调控，预防和治疗药物过敏是可能的。 本课题为国家自然科学基金（编号）、山西省自然科学基金（编号： 201601D102070 ）资助。 关键词：法医病理学；药物过敏；DNA 甲基化；CC 趋化因子配体5；HLA 相关基因 II