EphA4受体和组蛋白去乙酰化酶对大鼠海马神经元BDNF表达影响的研究.pdf

目 录 中文摘要 I 英文摘要V 常用缩写词中英文对照表 IX 前 言 1 第一部分 EphA4 受体对大鼠海马神经元BDNF 蛋白质和转录本表达的影响 . 3 1 材料和方法 3 1.1 动物实验及分组3 1.2 试剂和实验设备3 1.3 实验方法6 1.4 统计学分析10 2 结 果 11 2.1 拮抗EphA4 受体功能对大鼠海马区神经元BDNF 蛋白质表达的影响11 2.2 抑制EphA4 受体功能对大鼠海马区神经元BDNF 转录本表达的影响11 3 结 论 12 第二部分SAHA 通过抑制组蛋白去乙酰化酶功能影响脑缺血大鼠海马BDNF 转录本表达 13 1 材料与方法 13 1.1 动物实验及分组13 1.2 试剂和实验设备13 1.3 实验方法14 1.4 统计学分析18 2 结 果 19 2.1 SAHA 对脑缺血大鼠海马脑区BDNF 转录本表达的影响19 3 结 论 20 讨 论 21 参考文献 23 综 述 26 致 谢 42 个人简介 43 山西医科大学硕士学位论文 EphA4 受体和组蛋白去乙酰化酶对大鼠海马神经元BDNF 表达影响的研究 摘 要 脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor, BDNF ）属于神经营 养因子家族成员，可通过其酪氨酸激酶受体信号系统参与神经元发生分化、突触 可塑性和神经元存活等神经系统功能活动过程。BDNF 在脑卒中后神经元损伤的 保护和修复中发挥重要作用，然而，BDNF 蛋白质表达的调控机制不明。 酪氨酸激酶受体家族中最大的一类为 Eph 受体，ephrin 配体-Eph 受体信号 系统在机体发育过程和体内稳态维持中发挥重要作用。Eph 受体可分为EphA 和 EphB 两个亚型，EphA 受体主要参与神经系统发育过程中神经网络的形成、神经 再生和突触可塑性。研究发现，短暂脑缺血大鼠海马CA1 区锥体神经元的EphA4 受体水平上调，拮抗EphA4 受体功能可以减弱缺血后CA1 区锥体神经元死亡。 因此我们设想，Eph 受体是否通过影响BDNF 蛋白的表达，增强受损神经元的内 在保护机制。本实验通过培养大鼠海马脑区原代神经元，观察拮抗 EphA4 受体 功能后，神经元BDNF 蛋白质及不同转录本表达的变化。 前期研究发现，脑缺血再灌注后，大鼠海马CA1 区BDNF 蛋白质表达的降 低与CA1 区中BDNF 转录本IV 表达的降低相关。本研究通过建立大鼠短暂性 脑缺血再灌注模型，给予组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA，研究BDNF 在海马各 区差异表达与组蛋白乙酰化的关系。这将为临床上脑卒中的治疗以及神经元保护 提供新途径。 I 山西医科大学硕士学位论文 第一部分 EphA4 受体对大鼠海马神经元BDNF 蛋白质 和转录本表达的影响 目的： BDNF 在脑卒中后神经元损伤的保护和修复中发挥重要作用，然而，BDNF 蛋白表达的调控机制不明。通过培养大鼠海马脑区原代神经元，观察拮抗EphA4 受体功能后，神经元BDNF 蛋白及多种BDNF 转录本表达的变化。 方法： 1. 实验分组：采用1-3d 的SD 大鼠乳鼠，分离其海马组织，培养原代海马神 经元。将培养的大鼠海马脑区神经元随机分为正常对照组（control 组）和处理组 （EphA4-Fc 组），培养7d 后用于实验。 2. 应用Western blot 和RT-qPCR 检测技术，给予EphA4-Fc 拮抗EphA4 受 体功能，分析检测培养神经元BDNF 蛋白质及BDNF 多种转录本表达的变化。 结果： 1. Western blot 结果显示：与正常对照组相比，EphA4-Fc 组大鼠海马脑区神 经元BDNF 蛋白质表达水平升高。 2. RT-qPCR 结果显示：与正常