TWEAK_Fn14通过JNK通路致卒中后抑郁的机制研究.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表 VIII 前 言 1 1 材料与方法 3 1.1 实验动物 3 1.2 主要实验试剂 3 1.3 主要实验仪器 4 1.4 实验内容 4 1.5 统计学分析 10 2 结 果 12 2.1 各组大鼠行为学测试、体重变化比较 12 2.2 各组大鼠蛋白印迹结果 14 2.3 各组大鼠海马组织炎症分子水平 15 3 讨 论 18 4 结 论 20 参考文献 21 综 述 25 致 谢 34 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 35 个人简介 35 山西医科大学硕士学位论文 TWEAK/Fn14 通过JNK 通路致卒中后抑郁的机制研究 摘 要 目的： 卒中后抑郁 (PSD)是脑卒中的主要并发症，严重影响功能恢复和生活质量，炎 症假说在 PSD 的病理生理机制中发挥着重要作用。Fn14 是唯一已知的 TNF 家族成员 TWEAK 的信号受体。脑室内 (intracerebroventricular，ICV)注射 FC-TWEAK 小鼠表 现出明显的抑郁样行为和认知功能障碍，并有促进炎症、细胞调亡等作用，但在 PSD 中作用机制尚不清楚。TWEAK/Fn14 结合后，是否通过 JNK 通路介导神经炎症、细胞 凋亡引起PSD 在很大程度上仍是未知的。本研究采用大脑中动脉栓塞（MCAO）联合 ICV注射FC-TWEAK建立PSD 大鼠模型，探讨JNK信号通路的调控在 ICV注射FC-TWEAK 诱导的 PSD 中涉及的促炎、促凋亡机制，为 PSD 的治疗提供新的靶点。 方法： 60 只 Sprague-Dawley （SD）大鼠随机分为 5 组：正常对照组（Control，N=12）、 卒中组（MCAO，N=12）、卒中+二甲基亚砜组（MCAO+DMSO，N=12）、PSD 组（MCAO+TWEAK， N=12）、PSD +JNK 抑制剂组（MCAO+TWEAK+SP600125，N=12）；正常对照组不给予任 何处理，卒中采用的是 MCAO；于卒中大鼠 ICV 注射 FC-TWEAK，经行为学测试，确 定 PSD 组。卒中+DMSO 组 ICV 注射 DMSO 作为溶剂对照，PSD +JNK 抑制剂为 PSD 大 鼠 ICV 注射 SP600125。通过观察大鼠的旷场实验(OFT)、强迫游泳(FST)、蔗糖偏好 (SPT)、体重测量实验进行抑郁样行为测试。采用蛋白印迹 （Western blot）技术 检测大鼠海马组织相关蛋白 c-Jun 氨基末端激酶 ( JNK)、磷酸化 c-Jun 氨基末端激 酶 （P-JNK）、转录调节因子（c-jun）和半胱天冬酶 3 （caspase3）蛋白量的表达， 采用实时荧光定量 PCR 法 (RT-PCR)检测海马区炎症因子 IL-1β 、IL-6 和 TNFα mRNA 水平的表达。 结果： I 山西医科大学硕士学位论文 1.大鼠行为学测试： 1.1 旷场实验结果：在大鼠MCAO 术后 31 天时，PSD 组与卒中+DMSO 组比较不动 时间明显增加（P 0.05）；PSD +JNK 抑制剂组与 PSD 组相比较，不动时间明显减 少（P 0.05），差异具有统计学意义； 1.2 强迫游泳实验：在大鼠 MCAO 术后 30 天时，PSD 组与卒中+DMSO 组比较总不 动率明显增加（P 0.05）；PSD +JNK 抑制剂组与 PSD 组相比较，总不动率明显减 少（P 0.05），差异具有统计学意义； 1.3 蔗糖偏好实验：在大鼠 MCAO 术后 30 天时，PSD 组与卒中+DMSO 组比较蔗糖 偏好指数明显减少（P 0.05）；PSD +JNK 抑制剂组与 PSD 组相比较，蔗糖偏好指 数明显增加（P 0.05），差异具有统计学意义； 1.4 体重测量结果：在大鼠 MCAO 术后 31 天时，P