Intermedin通过抑制ROS保护缺氧_复氧诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究.pdf

山西医科大学硕士学位论文 目 录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表V 前 言1 1 材料与方法3 1.1 实验材料3 1.2 实验方法4 1.3 统计学分析8 2 结 果9 2.1 IMD 对ROS水平影响9 2.2 IMD 对NO 水平影响9 2.3 IMD 对eNOS解偶联的影响10 2.4 IMD 对BH 含量影响11 4 2.5 IMD 对GTPCH-1蛋白表达影响12 3 讨 论14 4 结 论16 参考文献17 综 述19 致 谢27 个人简历29 山西医科大学硕士学位论文 Intermedin通过抑制ROS保护缺氧/复氧诱导的血管内皮细胞 损伤的机制研究 摘 要 目的： 肾小管周围毛细血管(PTC)稀疏及破坏可以使得肾脏局部缺血缺氧从而导致急 性肾损伤 （AKI）-慢性肾脏病 （CKD）转变。而氧化应激所诱导的内皮细胞损害 是导致PTC破坏的根本原因。Intermedin(IMD)可抑制肾组织局部氧化应激反应，但 其保护内皮细胞的机制尚不清楚。内皮型一氧化氮合酶 （eNOS）解偶联是活性氧 族 （ROS）产生的重要来源，我们的预实验显示，IMD 能抑制eNOS解偶联，机制 值得深入研究。本实验通过研究IMD 对缺氧/复氧(H/R)诱导的人脐静脉内皮细胞 （HUVECs）的影响，阐明IMD 是否通过I型三磷酸鸟苷环化水解酶 （GTPCH-1） —四氢生物喋呤 （BH ）轴，抑制eNOS解偶联，从而减少ROS产生，保护血管内 4 皮细胞。 方法： 常规培养HUVECs，于三气培养箱中 （缺氧条件：92%N +5%CO +3%O ；复 2 2 2 氧条件：5%CO ，37℃）建立H/R 模型，将HUVECs 随机分为4 组：对照组(Control 2 组)、H/R 模型组、H/R+IMD 组、H/R+IMD + GTPCH-1抑制剂2，4-二氨基-6-羟基 嘧啶（DAHP）组，根据预实验所得的缺氧18h，复氧6h，建立H/R 模型。用DHE-ROS 检测法和DAF-FM-DA 法检测IMD 对各组ROS、一氧化氮 （NO）水平的影响，用 蛋白免疫印迹 （Westernblot）法检测IMD 对各组eNOS二聚体/单聚体、GTPCH-1 蛋白质表达的影响，用高效液相色谱法 （HPLC）检测IMD 对BH 含量的影响。 4 结果： 与对照组相比，H/R模型组中ROS水平明显升高，说明缺氧复氧诱导了氧化应激； I 山西医科大学硕士学位论文 在H/R模型基础上给予IMD干预后，ROS水平明显降低，证明IMD可以抑制ROS产生。 与对照组相比，H/R组NO水平呈明显下降，给予IMD后NO升高，证明IMD可以抑制 H/R损伤后NO的下降，改善内皮功能障碍。H/R后eNOS二聚体蛋白质表达降低，单 聚体表达增强，给予IMD干预后eNOS二聚体表达较H/R组增强，说明IMD能抑制eNOS 解偶联。进一步实验发现，与对照组相比，H/R后GTPCH-1蛋白质表达降低，BH 含 4 量明显减少，IMD干预后GTPCH-1表达增强，BH 含量上升，DAHP可以消除IMD对