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目 录
中文摘要I
英文摘要III
常用缩写词中英文对照表V
前 言1
1 材料与方法3
1.1 细胞培养和处理3
1.2 实时定量PCR3
1.3 蛋白印迹分析3
1.4 流式细胞仪分析4
1.5 酶联免疫吸附测定4
1.6 统计分析方法4
2 结 果5
3 讨 论9
4 结 论11
参考文献12
综 述14
致 谢25
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果25
个人简介26
山西医科大学 (博)硕士学位论文
PD-1/PD-L1抑制剂在LPS刺激的小鼠肺泡巨噬细胞中发挥抗
凋亡和抗炎作用
摘 要
目的:
脓毒症是机体对感染反应失调引起的危及生命的器官功能障碍综合征,而肺脏
是脓毒症主要的靶器官。脓毒症疾病发展引起的ALI 及ARDS至今无特效的治疗药
物,死亡率极高。因此,本实验研究的主要目的是明确PD-1/ PD-L1抑制剂是否能
减少肺泡巨噬细胞凋亡,恢复肺泡巨噬细胞免疫功能,提高清除细菌能力。另一方
面,明确PD-1/ PD-L1抑制剂是否能减少肺泡巨噬细胞炎症因子的释放,从而减轻
炎症反应及肺组织损伤程度,起到肺保护作用。
方法:
在无菌的6孔板中培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,并将其分为对照组(control),
LPS和LPS+BMS-1组。将脂多糖(LPS)(10ng/ mL)添加到LPS和LPS+BMS-1
组中培养24 小时。随后,将PD-1/ PD-L1抑制剂BMS-1(1μM)添加到LPS+BMS-1
组中培养72小时。通过qRT-PCR检测PD-1mRNA 的表达水平;蛋白印迹检Western
blot 测PD-1蛋白表达水平;流式细胞术检测MH-S细胞凋亡情况;ELISA 检测炎
性因子IL-1β,IL-6,TNF-α和IL-10 的水平。
结果:
小鼠肺泡巨噬细胞在分子和蛋白水平上均表达PD-1,并且在LPS刺激的MH-S
细胞中PD-1表达水平增加。与LPS组相比,LPS+BMS-1组的PD-1表达明显降低。
流式细胞仪结果显示,与LPS 组相比,LPS+BMS-1组的小鼠肺泡巨噬细胞凋亡也
明显减少。LPS组的促炎因子IL-1β,IL-6 和TNF-α显着升高,而抑炎因子IL-10
I
山西医科大学 (博)硕士学位论文
相对较低。LPS+BMS-1组的IL-1β,IL-6 和TNF-α的水平低于LPS组,而IL-10
则升高。
结论:
在体外实验中,与LPS组相比,PD-1/ PD-L1抑制剂可减少小鼠肺泡巨噬细胞
凋亡,以维持有效的免疫清除能力并减少炎症因子的释放。PD-1/ PD-L1抑制剂能
够减轻炎症反应,缓解由脓毒症引起的急性肺损伤,起到肺保护作用。因此,PD-1
/ PD-L1抑制剂可能成为脓毒症急性肺损伤潜在的治疗靶标。
关键词:脓毒症;急性肺损伤;小鼠肺泡巨噬细胞;凋亡;抗炎作用;PD-1/PD-L1
抑制剂
II
山西医科大学 (博)硕士学位论文
PD-1/PD-L1inhibitors exert anti-apoptosisand
anti-inflammatory activity inLPS-stimulated murinealveolar
macrophages
Abstract
Objective:
Sepsisisalife-threatening organ dysfunction syndromecausedby dysregulation of
thebodysresponsetoinfection,andthelungisthemaintarget organ
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