石蜡切片免疫组化与免疫荧光染色方法.docxVIP

石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法 1、组织的采集、固定和保存： 采取组织后， 方法一： 4%多聚甲醛（ 4%PFA）4 C 固定 1 小时（根据组织大小和致密程度调整固 定时间）或过夜 方法二：采用 bouin’s固定 RT 2h（6-8d tesis）or RT 过夜（成年 tesis） PBS 缓冲液洗三次，每次 5min，4 C 保存于 70%乙醇中。 2、组织的包埋、切片、展片及保存： ： 固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明， 52-54 C 石蜡包埋，常规切片，切片厚 4 -10 m，贴于处理过的干净载玻片上， 37 C 烤片过夜，之后收集于载片盒中， RT 密封保 存。 石蜡包埋： 保存于 4 C 70%乙醇中的组织样品 80%乙醇 15 min 95%乙醇 15 min 100%乙醇 15min 2 1/2 乙醇 1/2 二甲苯 15 min 二甲苯透明 5-10 min 1/2 二甲苯 1/2 石蜡 30 min 石蜡（ 1） 1.5hr 石蜡（ 2） 1.5-2.5hr 石蜡（ 3） 包埋 RT 保存 3、石蜡组织切片的免疫组化方法： 密封保存于 RT 的组织切片 二甲苯 (1) 20 min 二甲苯 (2) 20 min 100%乙醇 20min 95%乙醇 10 min 80%乙醇 10 min 通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈 切片在 PBS 中浸泡