芍药PlWRKY13和PlWRKY65基因表达模式及功能分析.pdfVIP

符号说明 μL: Microliter, 微升 mL: Milliliter, 毫升 L: Liter, 升 pg: Picogram, 皮克 ng: Nanogram, 纳克 μg: Microgram, 微克 mg: Milligram, 毫克 g: Gram, 克 nm: Nanometre, 纳米 μm: Micron, 微米 mm: Millimeter, 毫米 μM: μmol/L, 微摩尔每升 mM: mmol/L, 毫摩尔每升 s: Second, 秒 min: Minute, 分钟 h: Hour, 小时 d: Day, 天 KPa: Kilopascal, 千帕 rpm: Revolutionsper, 转速 bp: Base pair, 碱基对 nt: Nucleotide, 核酸碱基 PCR: Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应 Kan: Kanamycin, 卡那霉素 Amp: Ampicillin, 氨苄青霉素 Rif: Rifampicin, 利福平 MES: 2-(N-Morpholino) ethanesulfonic acid, 2-吗啉乙磺酸 AS: Acetosyringone, 乙酰丁香酮 DMSO: Dimethyl sulfoxide, 二甲基亚砜 DNA: Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 RNA: Ribonucleic acid, 核糖核酸 rDNA: Ribosomal deoxyribonucleic acid, 核糖体脱氧核糖核酸 cDNA: Complementary deoxyribonucleic acid, 互补脱氧核糖核酸 mRNA: Messenger ribonucleic acid, 信使核糖核酸 dsRNA: Double-stranded ribonucleic acid, 双链核糖核酸 siRNA: Small interfering ribonucleic acid, 小干扰核糖核酸 RNase: Ribonuclease, 核糖核酸酶 ITS: Internal transcribed spacer, 内转录间隔区 rpm: Revolutions per minute, 转速 SAR: Systemic acquired resistance, 系统获得性抗性 目 录 中文摘要I AbstractIII 1 引言 1 1.1WRKY 转录因子参与植物抗逆性研究进展 1 1.1.1WRKY 参与植物非生物胁迫研究进展 1 1.1.2WRKY 参与植物抗病研究进展2 1.2 病毒诱导的基因沉默 （VIGS）研究进展4 1.2.1VIGS技术原理4 1.2.2 TRV-VIGS 5 烟草脆裂病毒诱导的基因沉默技术 （ ）的研究进展 1.3 目的与意义6 1.4 技术路线6 2材料与方法7 2.1试验材料7 2.1.1植物材料培养7 2.1.2 菌株和载体7 2.1.3主要试剂及配置8 2.1.4 主要仪器8 2.1.5 引物及序列测定9 2.2 试验方法10 2.2.1病原菌的分离及鉴定10 2.2.2PlWRKYs 在胁迫处理下的表达分析12 2.2.3TRV-VIGS在芍药中的应用15 2.2.4 芍药红斑病接种及感病情况调查20 2.2.5芍药叶片内源激素的测定20 2.2.6病程相关基因表达分析23 3 结果与分析23 3.1病原菌的分离与鉴定23 3.1.1病原菌分离及形态鉴定23 3.1.2rDNA-ITS序列分析24 3.2PlWRKYs 在胁迫处理下的表达分析25 3.3VIGS沉默芍药基因体系的建立28 3.3.1pTRV2::PlWRKYs 载体的构建28 3.3.2TRV 病毒分子检测30 3.3.3qRT-PCR 检测PlWRKYs 基因沉默效率31 3.4PlWRKYs 的红斑病抗性32 3.4.1