农业畜牧行业生物化学实验教学大纲四川农业大学精品课程.pdfVIP

(农业畜牧行业)生物化学 实验教学大纲四川农业大 学精品课程 1 、分光光度法 2 、分光光度法在生物化学中的应用 3 、常用分光光度计：721 型、752 型紫外分光光度计的使用 三、层析法 1 、层析法的原理及应用 2 、常用的几种层析方法及原理：（1）纸层析；（2）薄面层析；（3）凝胶层析；（4）亲 和层析 四、电泳法 1 、电泳的基本原理及应用 2 、常见的几种电泳方法 （1）聚丙烯酰胺凝胶电泳 （2）琼脂糖凝胶电泳 （3）醋酸纤维薄膜电泳 （4）毛细管电泳 3 、影响电泳的主要因素 五、离心分离技术 1 、离心分离技术的原理和应用 2 、常用离心机的使用 六、生物大分子的分离纯化的一般原理和步骤 第二部分生物化学基础实验 实验一蛋白质的两性解离及等电点的测定（2 学时） 目的和要求：认识蛋白质的两性解离性质，了解等电点的意义及其与蛋白质分子沉降的 关系，学习蛋白质等电点测定方法。 实验内容：氨基酸通过肽键连接成多肽链，除N-端和 C-端外，还有一定数量的可解离 的侧链基团，因此蛋白质也是两性电解质。蛋白质分子上可解离基因的解离程度与溶液的pH 值有关。在一定 pH 条件下，就会解离而带电，带电的性质和多少决定于蛋白质分子的结构 及溶液的 pH 。在某一pH 条件下，蛋白质分子所带的正电荷数恰好等于负电荷数，即净电荷 等于零。此时蛋白质质点在电场中不移动，溶液的这一 pH 值称为该蛋白质的等电点（pI）。 + 如果溶液的 pHpI ，则蛋白质分子结合一部分H ，而带正电荷在电场中就向负极移动。反之， + 溶液的 pHpI ，则蛋白质分子会解离一部分H 而带负电荷，此时蛋白质分子在电场中就会向 正极移动。 - - COOHCOO COO + + +H -H PrPrPr + + -H +H + + NH NH NH 3 3 2 阳离子两性离子阴离子 pHpIpH=pIpHpI 在电场中：带正电，向负极移动不移动带负电，向正极移动 由于各种蛋白质解离基团的种类和数量不同，因此等电点也不相同。蛋白质在等电点时 净电荷为零，溶解度最低，易发生聚沉。配制不同 pH 的缓冲溶液，通过观察蛋白质在这些 缓冲液中的溶解情况，即可大致确定其等电点。 实验二可溶性蛋白质含量的测定—双缩脲法（3 学时） 目的和要求：掌握测定可溶性蛋白质含量常规测定的原理和操作方法，熟悉分光光度计 的使用。 实验内容：本实验介绍双缩脲法测定可溶性蛋白质的含量。双缩脲(H NOC-NH-CONH )可 2 2 2+ 由两分子尿素加热至 180℃左右生成，它在碱性条件下能与 Cu 结合生成紫红色络合物（称 双缩脲反应）。而蛋白质分子中含有两个以上相邻的肽键，其结构与双缩脲类似，因此也能 发生双缩脲反应，生成紫红色络合物，其反应后溶液颜色的深浅与蛋白质（浓度）含量在一 定范围内呈线性关系，符合比尔定律，而且与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，受蛋白质 特异性影响较小，故可利用此反应通过比色法测定蛋白质的含量，该法测定蛋白质浓度范围 为 1-10g/L 。 实验三薄层层析法分离鉴定植物组织中游离氨基酸 （3 学时供选作） 目的和要求：了解层析技术的一般原理，分类及应用范围。重点掌握薄层层析法的原理 及操作技术，用以分离鉴定植物组织中游离氨基酸组分。 实验内容：本实验以硅胶G 制成薄板来分离鉴定植物组织中的游离氨基酸组分。硅胶 G 加有 10—15%的煅石膏粉作为粘合剂，是微酸性的吸附剂，以它作为固定相，选择适当的溶 剂作流动相，由于各种氨基酸的极性不同，被硅胶G 吸附的程度和在流动相中的溶解度不同。 层析时，点在硅胶 G 薄板上的混合氨基酸被不同程度地吸附，当流动相从固