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LOGO 动物组织DA提现  LOGO 实验原理及目 实验方法及一般步骤 实验中注意事项 实验中常见问题  及的 1、核酸的分类 DNA(脱氧核糖核 主要存在于细胞核的染色体中。 核外也有少量DNA,如线粒体DNA( mtDNA),叶绿体DNA ( CPDNA),质粒DNA。 RNA(核糖核酸) 存在于细胞质中,如mRNA,rRNA,tRNA等。 除上述DNA,RNA外,还有非细胞形式存在的病豪和噬蔺 体,其或只合DNA,或只含有RNA。  实验原理及目的 ◆2、真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来 制备基因组DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在 于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白 质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取 DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷 基硫酸钠)和蛋白酶κ的溶液中消化分解蛋白质,再用酩 和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇 沉淀使DNA从溶液中析出。 蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA 胺四乙酸 一钠)存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应 体系中,SDS可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA 分离,EDTA则抑制细胞中 Dnasel的活性;而蛋白酶K可将 蛋白质降解成小肽或氨基酸,使DNA分子完整地分离出来  实验原理及目的 提取DNA主要是对基因和基因组进行分析。 心提取RNA主要是为了对基因表达进行分析 ☆PCR分析,基因文库的构建,基因探测等的研究基础  二、实验方法及一般步骤 目前从样品中分离DNA的方法主要有两种, 分为CTAB法和SDS法(表面活性剂,能溶解细 胞膜和核膜蛋白,是核蛋白解聚,从而使DNA得 以游离出来)。  实验方法及一般步骤 核酸制备中常用的去垢剂 核酿本身带负电荷,结合帶正电荷的蛋白质。用于核畋 提取的去垢荆,一般都是阴离子去垢荆。 去垢刺的作用: 1、嵱解膜蛋白及脂肪,使细胞膜破裂; 2、嵱解核糖体上面的蛋白质,使其解聚,将核酸释放出 3、对 RNase、 DNase有一定的抑喇作用。 如:SDS、脱氧胆酸钠、4基水杨酸餉、-1.5-二磺酸钠 三异丙基蔡磺酸钠  实验方法及一般步骤 核酸制备中常用的蛋百质变 作用 1.使蛋白质变性、沉淀,从核酸提取漩中分寫除去,以防造 成蛋白污慕。 2.使蛋白质叟性,故可使核糖体解聚释放出核酸。 3.某些蛋台质吏性荆也有抑制 RNase话性和破裂细胞的作用。 :苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC  实验方法及一般步骤 核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase:降解RNA 蛋白酶K:降解蛋白质 馆菌酶:破碎细胞  实验方法及一般步骤 1、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质 在细胞内通常与蛋白质结合,以复合物形式存在 橄滤于水,不嵱于乙醇,氯仿等有机滤 在酸性嵱漩中容易降解,在中性或弱碱性嵱漩中較穩定← DNA蹿漩粘度很大,RNA的粘度较小 在强火离心力的作用下,可以从蹿漩中沉降下来