生物化学实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应.pdfVIP

实验一 蛋白质和氨基酸的呈色反应 一、目的要求 验证蛋白质特性； 学习和掌握蛋白质呈色反应的原理和方法； 学习几种常用 的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二、实验原理 蛋白质中的某些化学键或氨基酸残基中的某些化学基团可以与某些特殊试 剂形成特定的有色物质。这些反应称为蛋白质的呈色反应。 各种蛋白质的氨基酸残基不完全相同。 因此，呈色反应产物的颜色也不完全 一样。呈色反应不是蛋白质所特有，一些非蛋白物质也能呈现类似的呈色反应。 因此，不能仅以呈色反应结果来判别被测物质是否为蛋白质。 三、呈色反应 双缩脲反应 1. 原理 两分子尿素经加热至 180°C 后可以缩合成一分子双缩脲， 并放出一分子氨。 双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成紫红色络合物，此反应称为双缩脲反应。 多肽及所有蛋白质均具有肽键， 与双缩脲分子中亚酰胺键结构相同， 也能发 生此反应， 因此，蛋白质在碱性溶液中与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的颜色 反应。 2. 器材与试剂 1) 器材 试管、药匙、电炉、试管夹、滴管。 2) 试剂 〈1〉蛋白质溶液 (10%卵清蛋白溶液 ) ：吸取鸡蛋清溶液 10ml，加蒸馏水稀 释，定容至 100ml。 〈2〉10%氢氧化钠溶液。 〈3〉1%硫酸铜 (CuSO4)溶液。 〈4 〉0.1%甘氨酸 (Gly) 溶液：称 0.1g 甘氨酸溶于蒸馏水中，稀释至 100ml。 〈5〉结晶尿素。 3. 实验步骤 双缩脲反应实验 试管 试剂/ 滴 1 2 3 4 尿素 ＋ 加热后的尿素 ＋ 蛋白质溶液 / 滴 3 0.1%Gly/ 滴 3 10%NaOH/滴 5 5 5 5 1%CuSO4/ 滴 1 1 1 1 显色现象 (1) 制备双缩脲：取结晶尿素少许 ( 约火柴头大小 ) ，放入干燥的小试管中。 微火加热至尿素熔解至硬化， 刚硬化时立即停止加热， 尿素放出氨， 此时双缩脲 即已形成。冷却后作为双缩脲样品 (1 号管) 。 (2) 另取 3 支试管，与 1 号管一起按表加样，混匀，观察各管颜色变化，记 录结果并解释现象。 茚三酮反应 1. 原理 蛋白质或氨基酸在弱碱性条件下， 其上的氨基与茚三酮共热可产生蓝紫色缩 合物。此反应为一切蛋白质和α - 氨基酸所共有，具有亚氨基的脯氨酸和羟脯氨 酸与茚三酮反应产生特征性的黄色化合物，含有氨基的其他化合物也能呈此反 应。 2. 器材与试剂 1) 器材 滤纸、试管、试管夹、药匙、电炉、滴管、吸管、水浴锅。 2) 试剂 〈1〉卵清蛋白溶液 100ml：与双缩脲反应相同。 〈2〉0.1%甘氨酸 (Gly) 溶液。 〈3〉0.1%茚三酮水溶液。 〈4 〉0.1%茚三酮 - 乙醇溶液： 0.1g