生物制药技术 微生物细胞的破碎 细胞破碎.docVIP

《生物制药技术》课程项目（任务）教学设计方案 教师： 苏艳 序号：29 教学项目 （任务）名称 发酵产物的提取与精制—微生物细胞的破碎 课时数 2 教学内容 主要知识点 细胞破碎的方法 重点、难点 细胞破碎的原理 教学目标 专业能力 1、掌握细胞破碎的原理和方法 2、能根据微生物细胞的特点选择合适的细胞破碎方法。 方法能力 自学能力、执行力、团队协作能力 学会共处，学会做人，与他人和谐相处、具有团结心和社会责任感 社会能力 学会与他人和谐相处、具有团结心和社会责任感 学生情况分析 学生学习了《生物化学》《微生物学》等前期课程，具备了学习本课程的基础知识。 教学环境要求 多媒体 教学方法 讨论教学、分组教学、启发教学 教学手段 分组教学 教学过程设计 教学步骤 教学内容 学生活动 时间分配 复习 发酵产物提取与精制的工艺过程 学生思考、回答问题 5min 导入：微生物细胞的破碎 微生物的代谢产物有的分泌到细胞或组织之外，例如细菌产生的碱性蛋白酶，霉菌产生的糖化酶等，称为胞外产物。还有许多是存在于细胞内，例如青霉素酰化酶，碱性磷酸酯酶等，称为胞内产物。 对于胞外产物只需直接将发酵液预处理及过滤，获得澄清的滤液，作为进一步纯化的出发原液，对于胞内产物，则需首先收集菌体进行细胞破碎，使代谢产物转入液相中，然后，再进行细胞碎片的分离。 学生思考：什么情况下需要微生物细胞的破碎 5min 提问 细胞破碎的常用方法 学生思考回答问题 5min 细胞破碎的常用方法 一、细胞破碎方法 常见的细胞破碎方法有：机械方法（球磨机、高压匀浆器、X-press法、超声波破碎）和非机械方法（酶解法、渗透压冲击、冻结和融化、干燥法、化学法）。 10min 球磨机 1.球磨机 研磨是常用的一种方法，它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使达到细胞的某种程度破碎。这些装置的主要缺点是在破碎期间样品温度迅速升高，通过用二氧化碳来冷却容器可得到部分解决。 看图思考球磨机的工作原理 5min 高压匀浆器 2.高压匀浆器 看图思考高压匀浆器的工作原理 10min X-press法 3.X-press法 一种改进的高压方法是将浓缩的菌体悬浮液冷却至-25?C至-30 ?C形成冰晶体，利用500 MPa以上的高压冲击，冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。细胞破碎是由于冰晶体的磨损，包埋在冰中的微生物的变形所引起的。 该法的优点是适用的范围广，破碎率高，细胞碎片的粉碎程度低以及活性的保留率高，该法对冷冻—融解敏感的生化物质不适用。 学生分析X-press法的工作原理 10min 超声波法 4.超声波法 细胞的破碎是由于超声波的空穴作用，从而产生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性漩涡在介质中的悬浮细胞上造成了剪切引力，促使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。 对于不同菌种的发酵液、超声波处理的效果不同，杆菌比球菌易破碎、革兰氏阴性菌细胞比革兰氏阳性菌细胞容易破碎，对酵母菌的效果极差。 该法不适于大规模操作，因为放大后，要输入很高的能量来提供必要的冷却，这是困难的。 学生分析：超声波法的工作原理 10min 酶解法 5.酶解法 利用酶反应，分解破坏细胞壁上特殊的键，从而达到破壁的目的。 优点：专一性强，发生酶解的条件温和。 缺点：酶水解费用较贵，一般只适用于小规模的实验室研究。 学生思考：酶的特点 10min 自溶作用 6.自溶作用 是酶解的另一种方法，所需溶胞的酶是由微生物本身产生的。影响自溶过程的因素有温度、时间、pH缓冲液浓度、细胞代谢途径等。自溶法在一定程度上能用于工业规模，但是，对不稳定的微生物容易引起所需蛋白质的变性，自溶后的细胞培养液过滤速度也会降低。 学生思考：微生物自溶的定义和特点 5min 化学法 7.化学法 用酸碱及表面活性剂处理，可以使蛋白质水解，细胞溶解或使某些组分从细胞内渗漏出来。某些脂溶性溶剂也能作为化学处理的方法，如丁醇、丙酮、氯仿及尿素等。但是，这些试剂容易引起生化物质破坏，还会带来分离和回收化学物质的问题。 学生思考：化学法的作用原理 10min 破碎方法的选择 二、破碎方法的选择 选择合适的破碎方法需要考虑下列因素： 1.细胞的数量； 2.所需要的产物对破碎条件(温度、化学试剂、酶等)的敏感性； 3.要达到的破碎程度及破碎所必要的速度， 4.尽可能采用最温和的方法； 5.具有大规模应用潜力的生化产品应选择适合于放大的破碎技术。 5min 作业 细胞破碎的方法有哪些？基本原理、适用范围。 教学参考资料、网站 《发酵工程》，黄方一、叶斌主编，华中师范大学出版社 教学后记 （包括自我评价与学生评价，教学过程